广西种猪场猪瘟监控方法的建立及其应用

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猪瘟(Hog Cholera,HC)又称古典猪瘟(Classical Swine Fever,CSF),是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,也是世界范围内危害最严重的猪病之一,被国际兽疫局(OIE)列为必须通报的动物传染病,我国将其列为一类传染病。猪和野猪是其唯一宿主。目前CSF仍在我国持续流行,免疫失败现象时有发生,给CSF防控带来困难。本试验旨在建立一套适合广西猪群的CSF防控模式,为大面积控制和消灭该病提供科学依据。一、猪瘟病毒抗体检测用阻断ELISA方法从不同免疫剂量、母猪的不同胎次和母源抗体消长规律及抗体持续期4个方面对猪瘟病毒抗体进行检测,同时将正向IHA和阻断ELISA两种抗体检测方法在不同猪场应用并比较,结果如下:A.分别用CSF(脾淋源和细胞源)活疫苗(各一个批次)以1、1.5、2和3头份4种不同的剂量分别免疫同一个猪场的80只断奶仔猪,检测仔猪体内CSF抗体上升速度。结果显示,免疫剂量2头份的仔猪抗体上升速度最快,其次是剂量为3头份的仔猪,最慢是1头份和1.5头份的仔猪。CSF脾淋源活疫苗免疫效果略优于CSF细胞源活疫苗。B.对某个猪场的产后1个月的1-5胎次的母猪用CSF脾淋源活疫苗以2头份剂量各免疫6头,检测免疫前后各胎次母猪CSF抗体变化情况。结果5胎次母猪抗体上升最快,其次是4胎次母猪,3胎次母猪第三,1胎次母猪抗体上升最慢。C.通过对同一个猪场的1-5胎次母猪产后40d和其所产仔猪出生后40d内母源抗体消长情况作比较,得知母猪产后40d的抗体滴度平均比仔猪高6.02-11.2%,仔猪的抗体水平与母猪的抗体水平呈正相关。母猪和仔猪的抗体均随着哺乳期的推移逐渐下降,并且仔猪母源抗体衰减速度比母猪抗体衰减速度快。产后10d、20d、30d和40d的母猪的抗体阳性率分别为100%、96%、85%和76%,胎次越高,抗体水平也越高。仔猪在出生10d、20d、30d和40d的抗体阳性率分别82%、74%、66%和46%。抗体表现阴性的猪不能阻止CSF野毒的侵袭,且有排毒和散毒危险。在产后20d时有4%母猪不能阻止CSF野毒的侵袭,到产后40d时有24%的母猪不能阻止CSF野毒的侵袭;对仔猪来说,40d时CSF抗体阳性率仅为46%,需进行CSF疫苗免疫。D.用脾淋源CSF活疫苗以1头份的剂量免疫一个猪场25日龄的断奶仔猪20头,在免疫后4d,没有1份猪血清抗体达到阳性,免疫后10d~80d(间隔10d)的抗体阳性率平均分别是为43%、58%、76%、100%、85%、66%、48%和32%,免疫后40d抗体达到最高峰。E.用CSF正向IHA检测广西5个种猪场800份不同生长发育阶段的猪血清CSF抗体水平,用阻断ELISA方法检测对2个种猪场304份不同阶段的猪血清中CSF抗体水平,并比较两种方法在CSF抗体检测上的差异,结果显示,两种方法均可用于猪场常规CSF抗体监测,将这两种抗体滴度值之间进行平行比较,两者复合性不高,仅为62%左右,但ELISA的敏感性明显高于IHA。二、血清中猪瘟野毒感染调查及血清抗体与猪瘟病毒Erms之间的关系探讨用CSFV糖蛋白Erns ELISA试剂盒检测2006年6个种猪场1614份猪血清,发现广西种猪场CSF野毒感染情况严重,平均阳性率达25.22%(407/1614);同时将CSF两种抗体(IHA和阻断ELISA)滴度值按高低分别糖蛋白Erms阳性率之间进行比较,将IHA和阻断ELISA抗体滴度值按高低,分别与糖蛋白Ems阳性率之间进行比较,发现在两种检测方法的任何一个抗体滴度均可出现糖蛋白Ems阳性,抗体滴度值与糖蛋白Ems阳性率没有直接的线性关系,在抗体滴度值偏低或偏高时,糖蛋白Ems的阳性率会高些。三、猪群猪瘟病毒(CSFV)检测分别用CSFV糖蛋白Ems (gp44/48)ELISA、CSF抗原ELISA、RT-PCR和荧光抗体染色法四种方法对广西种猪群进行CSFV检测和比较,结果如下:2006-2007年用CSF抗原ELISA共检测850份活种猪的全血样品,阳性76份,阳性率为8.94%(76/850);2005-2007年用RT-PCR方法检测病死猪病料434份,阳性44份,阳性率为10.14%(44/434),公猪精液1317份,阳性51份,阳性率为3.87%(51/1317),检测母猪扁桃体867份,阳性23份,阳性率为2.65%(23/867);2006年用荧光抗体染色法检测250份猪扁桃体,阳性43份,阳性率为17.2%(43/250),2007检测250份猪扁桃体全部为阴性。四、几种检测活猪感染猪瘟病毒的方法比较分别用CSFV糖蛋白Ems (gp44/48)ELISA、CSF抗原ELISA、RT-PCR和荧光抗体染色法四种方法这四种方法对2个猪场的血清、扁桃体、全血样品进行一一对应CSFV检测和比较,结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,RT-PCR方法的次之,CSF抗原ELISA方法第三,但重复性最好,CSFV糖蛋白Erms检出率最低,但仍可筛选出感染CSF野毒猪,与CSF抗原ELISA方法的符合性达75%;三种样品中用扁桃体检测重复性最好。通过淘汰CSFV阳性猪,CSF的发病率逐渐下降,病料中CSFV阳性率从2004年的27.45%下降到2007年的2.25%;母猪CSFV阳性率从2005年的8.11%下降到2007年的0.3%,种公猪精液中CSFV的阳性率从2005年的6.67%下降到2007年的O。
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