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以动脉粥样硬化为代表的心血管疾病是一种慢性疾病,随着人口老龄化的加剧,心血管疾病的仍是全球承认过早死亡的主要原因,因此,阐明其发病机制及转归至关重要。血管重构是大多数心血管疾病的发病和进展的基础,高饱和脂肪酸亦是心血管疾病的危险因素,近年来研究证实miR-155对于血管稳态及血管重构具有至关重要的作用,因此,本研究以miR-155为着眼点,探讨其调控以棕榈酸为代表的饱和脂肪酸诱导的血管损伤的作用,明确其调控机制。第一部分动脉粥样硬化miR-155的差异表达目的:研究观察miR-155在动脉粥样硬化患者血清中的表达差异,探讨miR-155与动脉粥样硬化的相关性。方法:经伦理审查及患者知情同意条件下,采集动脉粥样硬化患者及健康体检者血清各30例,通过RT-PCR检测动脉粥样硬化患者血清中miR-155含量进行检测。结果:检测结果提示,动脉粥样硬化患者血清标本中的miR-155水平较健康对照组呈显著下调,差异具有显著的统计学差异。结论:动脉粥样硬化患者血清中miR-155表达下调,此异常结果提示miR-155可能在动脉粥样硬化起病及其进展过程中发挥作用。第二部分miR-155调控棕榈酸诱导的血管内皮细胞损伤作用机制目的:研究探讨miR-155调控棕榈酸诱导的血管内皮细胞损伤的相关通路及其调控机制。方法:1.培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),予棕榈酸干预后,提取HUVEC总RNA,RT-PCR检测HUVEC中miR-155的表达水平。2.用0.1mM的棕榈酸作用于HUVECs,转染miR-155模拟物(mimics)/抑制剂(antagomir)或wnt通路抑制剂XAV939处理HUVECs,将HUVECs分为以下六组:Control组;palmitate组;mimics+palmitate组;mimics + palmitate+ XAV939 组;antagomir+ palmitate 组;antagomir+ palmitate+ XAV939 组。3.采用RT-PCR检测HUVECs中miR-155以及Wnt信号通路β-catenin及CyclinD的表达水平的影响。4.MTT法检测各组细胞的增殖功能;5.Transwell实验检测细胞迁移能力;6.流式细胞仪检测细胞凋亡。7.Western blot检测Wnt各蛋白的表达情况,免疫荧光检测β-catenin在细胞中的定位。结果:1.棕榈酸下调HUVECs中miR-155的表达。2.在棕榈酸诱导的HUVECs中Wnt信号通路关键蛋白β-catenin及CyclinD显著升高,细胞核上的β-catenin蛋白的表达增加;3.在棕榈酸诱导的HUVECs中,过表达miR-155能够促进细胞增殖,而抑制miR-155则相反;4.抑制Wnt信号通路能够加强miR-155过表达在棕榈酸诱导的HUVECs中的抗内皮细胞损伤作用,从而促进HUVECs细胞增殖,降低HUVECs细胞凋亡;5.相反地,抑制Wnt信号通路能够部分逆转抑制miR-155在棕榈酸诱导的HUVECs中的促内皮细胞损伤作用。结论:1.棕榈酸能下调miR-155的表达;2.miR-155通过负向调控Wnt信号通路减少棕榈酸诱导的HUVECs细胞凋亡,促进HUVECs细胞增殖;为防治与内皮损伤相关的心血管疾病提供了理论依据。第三部分研究探讨miR-155调控棕榈酸诱导的血管内皮细胞炎症反应目的:通过棕榈酸诱导的HUVECs后,干预miR-155表达,检测HUVEC细胞中活性氧、炎症因子、黏附因子的表达,进一步探讨miR-155调控棕榈酸诱导的血管内皮细胞损伤的分子机制。方法:1.在棕榈酸诱导的HUVECs中,过表达及抑制miR-155,检测HUVEC细胞中ROS水平;2.过表达及抑制miR-155,检测HUVEC中IL-6、TNF-α、黏附因子的表达;结果:抑制Wnt信号通路能够加强miR-155过表达在棕榈酸诱导的HUVECs中的抗内皮细胞损伤作用,过表达miR-155能够下调炎性因子IL-6和TNF-α,降低ROS水平。结论:miR-155通过负向调控Wnt信号通路减少棕榈酸诱导的HUVECs细胞活性氧产生及炎性细胞因子表达,为防治与内皮损伤相关的心血管疾病提供了理论依据。第四部分研究探讨miR-155调控棕榈酸诱导的血管损伤的管壁重构机制目的:通过小鼠体内实验,研究干预小鼠体内miR-155表达,提取小鼠主动脉组织,观察干预小鼠体内上调及下调miR-155,其对棕榈酸诱导的血管损伤的血管重构特点及机制;方法:采用FVB小鼠80只,按以下分组:1.空白对照组(n=20):正常饲养,尾静脉注射生理盐水;2.棕榈酸酯组(n=20):添加棕榈酸喂养,尾静脉注射生理盐水;3.miR-155下调+棕榈酸酯组(n=20):添加棕榈酸喂养,尾静脉注射miR-155antagomirmiR-155;上调+棕榈酸酯组(n=20):添加棕榈酸喂养,尾静脉注射mimics;4.干预后收集小鼠主动脉,大体标本观察主动脉管壁形态变化,免疫组化检测主动脉炎症因子的表达及其分布特点,western blot检测wnt信号通路关键蛋白水平变化。结果:1.高棕榈酸喂养能诱导小鼠主动脉管壁病理性重构;2.上调高棕榈喂养小鼠miR-155表达,能显著抑制wnt信号通路的激活,抑制主动脉内膜TNF-α、中外膜IL-6的表达;结论:1.高棕榈酸喂养能诱导小鼠主动脉管壁病理性重构;2.miR-155对高棕榈酸诱导的主动脉管壁损伤重构具有保护性作用。