桑叶中1-脱氧野尻霉素的检测、提取及其生理活性研究

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桑叶中含有的1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin, DNJ)可以抑制α-葡萄糖苷酶、葡萄糖淀粉酶的活性,具有抗病毒、减肥和增加胰岛素敏感性等多种重要生理功能。本文首先利用反相高效液相色谱建立了检测桑叶中DNJ含量的方法。利用该方法检测了132份桑树品种的DNJ含量,分析了不同纯化工艺对提高桑叶DNJ纯度的影响。利用糖尿病模型小鼠研究了DNJ的降血糖活性。为了测定桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量,我们建立了以芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)为衍化剂的柱前衍生化-反相高效液相紫外检测法。以0.05mol/LHCl为粗提桑叶粉DNJ的溶剂,芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)为衍生化试剂,pH值8.50硼酸盐为衍生化缓冲液时,衍生化和RP-HPLC检测效果最好。反相高效液相色谱-紫外检测法检测DNJ时,流动相中乙腈:0.1%-醋酸为55:45(V/V)时色谱分离效果最好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,相关系数为0.9852。在建立了检测方法后,我们对132个不同品种的桑叶中DNJ含量进行了测定。结果显示这些品种的DNJ平均含量为0.07511%,标准差为0.028428。其中,竹场2号的DNJ含量最高,达到0.1472%,观音桑的DNJ含量最低,为0.0134073%。此外,不同叶位的桑叶的DNJ含量不同,随着桑叶发育成熟,DNJ的含量从上叶位到下叶位逐渐降低。根据以上实验结果和桑叶价格、产地等方面的综合因素,我们确定了作为最终提取原料的桑叶材料。利用该材料,以乙醇结合超声处理所得的粗提物中,DNJ纯度仅为1.2842%。利用大孔树脂(3.3452%)、阳离子交换树脂(12.3873%)和硅胶树脂分级纯化后,纯度最终可达到19.0857%,符合食品添加剂的要求。为了调查DNJ生理活性,我们以糖尿病小鼠模型为研究对象,将DNJ添加到饲料中喂养小鼠,并和喂养阿卡波糖及喂养普通饲料的小鼠进行对比,来评价DNJ长期食用抑制糖尿病的作用。这一我们首创的喂养方法,避免了常规灌胃方法对小鼠的伤害,保证了分析结果的可行性。结果表明:喂食高剂量DNJ(40mg/kg)40天后,小鼠血糖显著降低,与喂饲正常饲料的模型差异达到显著水平;而低剂量(20mg/kg)和中剂量(30mg/kg)组与对照组差异不显著。
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