茶树花提取物的抗氧化活性及其对HepG2细胞的抗增殖活性

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科技的进步促进了人类生活品质的提高和社会的发展,但同时也造成了空气污染、农药残留、重金属、辐射等副作用,给人们带来了额外的机体过氧化负担,激发活性氧自由基的生成,而活性氧自由基是一种因辐射或者机体自然代谢的副产物的影响而产生的诱变剂,包括O2、H2O2、·OH等,一旦在体内长期积累,就会对DNA、蛋白质和脂质造成氧化性损伤,这些损伤是机体衰老和老年退行性疾病,如心脑血管疾病、免疫系统衰退、脑功能障碍等的主要原因。尤其是DNA的氧化损伤会导致DNA畸变和原癌基因、肿瘤抑制基因突变,诱变出细胞的无限增殖能力,导致癌症和肿瘤。近年来,在“药食同源”这一新概念的倡导下,通过摄入天然植物功能食品来清除体内多余的自由基,防治慢性疾病,延缓衰老已成为重要的保健手段。关于各种功能食品的研究不断深入,不少天然植物,如茶叶,已经被证实具有抗氧化、抗增殖、抗辐射等保健效果和对疾病的防治能力。茶树花与茶叶成分类似,蕴含有大量的活性物质,且产量巨大,理论上也有强力的抗氧化和抗增殖等效果,但长期被视为茶叶外无用的副产品,其相关的功能研究也很少,造成了资源的浪费。因此,本研究着力于探明不同茶树花品种、不同部位(全花、花瓣和花粉)的抗氧化、抗增殖能力以及他们之间的相关性。主要研究内容和成果如下:1.采用ORAC法、PSC法和CAA法对六个茶树花全花提取物进行抗氧化活性评价,结果表明:四川群体品种的ORAC、PSC、CAA值(未经PBS清洗)均是最高,分别为3504.99±281.65μmol Trolox/g、1442.73±75.01μmol VC/g和24.01±0.20μmol Quercetin/g;四川群体品种的CAA值(经PBS清洗)与最高的福选九号无显著差异,为10.53±0.42μmol Quercetin/g。因此,在所测六个品种中,四川群体品种具有最高的体外抗氧化活性和细胞抗氧化活性,是抗氧化能力最强的茶树花品种。2.采用ORAC法、PSC法和CAA法对六个茶树花花瓣和花粉提取物进行抗氧化活性评价,结果表明:四川群体品种的花瓣和花粉有最高(或与最高的值无显著差异)的ORAC值(2947.48±165.99μmol Trolox/g和4575.16±170.74μmol Trolox/g)、PSC值(632.09±73.91μmol VC/g和1060.50±82.28μmol VC/g)、经PBS清洗的CAA值(11.19±0.37μmol Quercetin/g和11.73±0.56μmol Quercetin/g)和未经PBS清洗的CAA值(24.29±1.39μmol Quercetin/g和25.71±0.26μmol/g)。因此,在所测六个品种中,四川群体品种茶树花花瓣和花粉具有综合最高的体外抗氧化活性和细胞抗氧化活性,是抗氧化能力最强的品种。3.将各全花、花瓣和花粉提取物的ORAC、PSC和CAA值与其对应的总酚、咖啡碱、儿茶素等含量进行相关性分析。结果表明:总酚含量、总儿茶素含量与ORAC、PSC和CAA值之间存在显著或极显著正相关;儿茶素单体中的EGCG与各抗氧化活性值均有极显著(p<0.01)的相关性,其相关性较其他单体更强且稳定。EGCG的含量与抗氧化活性有最显著的相关性,可以较好的预测茶树花样品的抗氧化能力。4.用六个品种茶树花的全花、花瓣和花粉提取物对HepG2人肝癌细胞进行抗增殖活性的检测,并计算其增殖率和半数效应浓度(EC50)。结果显示:在所有样品中,福选九号的全花和花粉有最低的EC50值,分别为55.28±17.98和63.95±9.77 mg/L,说明福选九号的全花和花粉有最强的抗增殖活性;四川群体品种的花瓣有最低的EC50值,为72.56±26.22 mg/L,所以四川群体品种的花瓣有最强的抗增殖活性。5.将全花、花瓣和花粉提取物的各个EC50值与其对应的ORAC、PSC、CAA值进行相关性分析。结果显示:样品EC50与ORAC值(R2=—0.389,p<0.01)之间有极显著的负相关关系,与PSC值(R2=—0.179,p>0.05)无显著相关性;与两个CAA值也均无显著(p>0.05)相关性,因此,ORAC抗氧化活性值与抗增殖活性有显著的正相关。此外,ORAC、PSC、CAA值之间均存在极显著(p<0.01)相关性,表明本文所选择的体外或间接体内抗氧化活性评价方法对样品的评价结果是一致的。6.对茶树花的全花、花瓣和花粉提取物的生化成分及抗氧化、抗增殖活性整体进行显著性分析,结果显示:花粉和花瓣样品的总酚含量显著高于(p<0.05)全花样品,花粉和花瓣样品之间无显著差异;花粉样品的总儿茶素与酯型儿茶素含量最高(p<0.05);花粉和花瓣样品的ORAC值显著高于(p<0.05)全花样品,花粉和花瓣样品之间无显著差异(p>0.05);花粉样品的PSC值最高(p<0.05),EC50值最低(p<0.05);全花、花瓣和花粉的CAA值均无显著差异(p>0.05)。综上,在六个重庆地区常见的茶树花品种中,花粉提取物的酚类物质含量高,体外(in vitro)抗氧化能力强,抗增殖能力最强,花瓣次之;CAA抗氧化评价方法所得的值与部位无关。
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