目前，国内养猪业普遍存在多病原致病的困扰，尤其是断奶仔猪的多病原混合感染，这一现象也常见于全球养猪业中，至今未找到有效预防与控制措施。其中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)与副猪嗜血杆菌(Haemopilus parasuis，HPS)的混合感染极为广泛，给养猪业带来巨大损失。为了预防和控制猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌病的混合感染，同时减轻其它病原的感染或协同感染，本课题从PCV2与HPS二联疫苗研制着手，具体内容如下：　　(1)酵母重组表达质粒pGAPZα A-ORF2经Bln I酶线性化，电击转化X33毕赤酵母感受态细胞。转化菌液用预冷山梨醇30℃温育静置培养45min以上，加入1mLYPD液体培养基，30℃振摇1h后均匀涂布于YPDS(含100μ g/mL ZeocinTM)固体培养基，置30℃温箱培养3天左右至单菌落出现。挑取单菌落培养并PCR鉴定，对表达上清SDS-PAGE和Western Blotting分析证实所表达蛋白为目的蛋白(27KD)的2倍大小(54KD)，且具有良好的免疫原性，综合分析为目的蛋白二聚体。　　(2)对疑似副猪嗜血杆菌感染的猪只进行解剖、观察、细菌分离，所获疑似副猪嗜血杆菌革兰氏染色、生化鉴定、PCR鉴定、16S rRNA同源性分析。已确定为副猪嗜血杆菌的菌株选择若干营养状况较好菌株接种SPF级昆明小鼠，筛选出毒力较强菌株HPS1106，并且进一步研究显示其不同代次菌株生化特性稳定，毒力稳定，因此可以做为疫苗基础菌株。　　(3)按1％的量接种HPS1106菌株于TSB培养基中37℃培养12小时。后经0.2％甲醛37℃灭活10小时，离心、洗涤、浓缩，将浓缩好的菌液加入pGAPZα A-ORF2-33表达上清中，与不同佐剂混合并制备PCV2与HPS二联苗。对二联苗进行HPS攻毒保护，PCV2抗体检测等试验，综合分析确定最佳免疫佐剂，并成功制备了PCV2与HPS二联铝胶佐剂疫苗。　　综上所述，本实验成功构建了猪圆环病毒2型ORF2基因重组酵母菌pGAPZαA-ORF2-X33，筛选出副猪嗜血杆菌疫苗基础菌株，在两者的基础之上成功研制了PCV2与HPS二联疫苗，动物实验证实二联苗具有良好免疫保护性。