随着社会经济的发展,糖尿病(diabetes)正成为全球范围流行的疾病。2型糖尿病(type2diabetes)是糖尿病中最主要的类型,多由于机体产生胰岛素相对不足或由于机体细胞对胰岛素反应性下降,且2型糖尿病常见于肥胖(obesity)个体。近年来,肥胖的发生率越来越高,而肥胖的一个重要特征是胰岛素抵抗(insulin resistance),后者恰是2型糖尿病的主要发生机理。胰岛素抵抗是指机体需要较之正常状态更多的胰岛素才能产生与正常状态同等生物学效应的一种病理状态。越来越多来自动物以及临床研究的证据表明,炎症(inflammation)反应与胰岛素抵抗有着密切联系。在啮齿类动物的肥胖模型中已经证明,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α这一前炎症因子在肥胖导致的胰岛素抵抗中起着极其重要的作用。现在的观点认为,脂肪是产生炎症相关细胞因子及其他生物活性物质的场所。除TNF-a之外,这些细胞因子还包括白介素(interleukin, IL)-6,瘦素(leptin),血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A, SAA),抵抗素(resistin),单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein, MCP)-1,血浆纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor)-1,血管紧张肽原(angiotensinogen),内脂素(visfatin),视黄醇结合蛋白(retinol-binding protein)-4等等。此外,随着细胞内炎症信号通路方面的研究,对于胰岛素抵抗产生机制的认识也越来越清楚。现有的研究表明,c-JNK的N末端激酶(c-JUN N-terminal kinase, JNK)以及核因子-κ B (nuclear factor-κ B, NF-κ B)信号通路在胰岛素抵抗发生中起着极其重要的作用。除了炎症,活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)水平的上升是胰岛素抵抗发生诸多因素中的重要因素之一,主要的实验证据有：1)在体外培养的3T3-L1脂肪细胞中,高剂量的过氧化氢或者其他可导致ROS产生的物质处理后可引起胰岛素抵抗；2)在肥胖个体或实验动物研究中发现氧化应激(oxidative stress)的指标均明显升高。研究还发现,在高脂饮食(high-fat diet, HFD)喂养的小鼠中,ROS产生相关的基因在胰岛素抵抗或者肥胖出现之前就已经开始上调。此外,多项临床研究还发现胰岛素抵抗或糖尿病患者经抗氧化剂治疗后,机体的胰岛素敏感性增加。Apocynin (4-hydroxy-3-methoxy-acetophenone)是药用植物Himalayan herb Picrorhiza kurrooa Royle提取物的组成成分,具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADPH)氧化酶的特异性抑制作用,因而作为一种抗氧化剂被广泛用于多项研究之中。除了抗氧化作用之外,apocynin还被发现具有抗炎的作用,它可抑制自发性高血压大鼠中NF-κB的激活,下调TNF-α在冠状动脉中的表达,在静脉内皮细胞中降低TNF-α所致的血管细胞间粘附分子(vascular cell adhesion molecule, VCAM)-1的表达,抑制多形核粒细胞(polymorphonuclear granulocyte)的趋化,减少小鼠气管内过氧亚硝基阴离子,减轻人关节软骨中的炎症介导的软骨破坏,并且降低人单核细胞中环加氧酶(cyclooxygenase, COX)-2的表达。但是,apocynin在胰岛素抵抗中的治疗作用及其机制还没有被系统的研究。本研究主要目的之一是观察apocynin对高脂诱导胰岛素抵抗小鼠的治疗效果,并探讨其与炎症抑制和氧化损伤拮抗相关的治疗机制。促红细胞生成素(Erythropoietin, EPO)是肾脏产生的一种造血生长因子,上世纪被用于临床疾病的治疗。后续的临床应用研究发现,EPO除了具有促进机体造血功能之外,还呈现抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用。临床上发现,在伴有或不伴有糖尿病终末期肾衰(end-stage renal disease, ESRD)的透析治疗患者,采用EPO治疗后胰岛素抵抗有所减轻,但相关机制尚未阐明。本研究在观察分析Apocynin、EPO胰岛素抵抗治疗作用的同时,将深入探讨这两种药物针对胰岛素抵抗的治疗机制。第一部分Apocynin的抗氧化作用对高脂小鼠胰岛素抵抗的影响这部分主要研究apocynin对高脂饮食导致的胰岛素抵抗小鼠的氧化应激和抗氧化酶的影响。C57BL/6J小鼠经12周高脂饮食喂养后,呈现明显的胰岛素抵抗特征。再此基础上给予apocynin (2.4g/L,饮水中)治疗5周。结果显示apocynin治疗可明显改善高脂小鼠的高血糖、高胰岛素血症以及高脂血症。同时腹腔注射糖耐量实验(intraperitoneal glucose tolerance test, IPGTT)以及胰岛素抵抗的动态模型评估(homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR)均显示高脂小鼠经apocynin治疗后其胰岛素敏感性增高。与未治疗组相比,apocynin治疗组的血清丙二醛(malondialdehyde, MDA)明显降低而血清过氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)明显增高,提示apocynin可抑制系统的氧化应激。同样,在肝脏中MDA的水平也在apocynin治疗后明显降低,而与抗氧化系统(antioxidative defense system)相关的SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione-peroxidase, GSHpx)均升高。与此对应,肝脏内谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量则减少。此外,我们还意外的发现肝脏过氧化氢酶(catalase, CAT)在apocynin治疗后明显降低,这可能是apocynin治疗后肝脏内过氧化氢以及氧化应激减少的佐证。这些结果揭示了apocynin可以在高脂小鼠中通过减轻机体细胞的氧化应激来缓解胰岛素抵抗。第二部分Apocynin在高脂小鼠中通过抑制炎症而改善胰岛素抵抗这一部分主要研究apocynin对高脂小鼠导致的胰岛素抵抗模型中炎症方面的影响。经12周高脂饮食喂养后,有明显胰岛素抵抗表征的C57BL/6J小鼠进行apocynin治疗实验(2.4g/L,加入饮用水中,持续治疗5周)。结果显示空腹血糖、胰岛素耐量以及糖耐量实验均显示了高脂小鼠胰岛素敏感性的改善。血清内炎症因子TNF-α、IL-6以及Leptin的水平在apocynin治疗组均明显降低。肝脏TNF-α、IL-6、MCP-1以及脂肪组织内TNF-α、IL-6、MCP-1和瘦素的基因表达在apocynin治疗后也明显降低。更重要的是,肝脏内转录因子NF-κB的活性在apocymn治疗后被明显抑制。上述结果表明,apocynin在高脂小鼠导致的胰岛素抵抗模型中可减少循环血液、肝脏以及脂肪组织内的炎症因子,可能与apocynin减轻高脂小鼠胰岛素抵抗的机制有关。第三部分EPO的抗炎和抗氧化作用对高脂小鼠胰岛素抵抗的影响越来越多的研究发现EPO除了具有促进红细胞生成的作用之外,还有其他多种生物学功能。最近研究发现EPO可以减轻胰岛素抵抗,但是其确切机制尚未阐明。在本部分研究中,高脂导致的胰岛素抵抗小鼠根据不同的EPO治疗剂量以及时程分为4个大组。结果发现,EPO减轻胰岛素抵抗的作用可在2周、5周、以及7周治疗组中体现。在对其治疗机制的研究中,我们分析了EPO对胰岛素抵抗小鼠的胰岛素通路、脂质代谢、氧化应激以及炎症等方面的影响。结果发现：1)EPO可明显升高肝脏AKT的活性,而AKT是胰岛素通路中的关键因子；2)EPO可降低肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c (sterol regulatory element binding protein isoform, SREBP1-c)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase, FAS)的表达,降低脂肪组织内SREBP1-c的表达,增加脂肪组织脂蛋白酶(lipoprotein lipase, LPL)的表达；3)EPO可明显增高肝脏SOD. Cu-Zn SOD. GSH. GPx的水平,降低MDA;4) EPO可降低肝脏以及脂肪组织内炎症相关基因的表达,同时降低血清TNF-α、IL-6以及leptin的水平。EPO还抑制了肝脏内JNK1/2以及NF-κB的活性。我们的工作还发现,低剂量、长程的EPO治疗并不引起血红细胞的升高。总之,本研究在动物模型中证明了EPO可以通过改善胰岛素通路、脂质代谢、氧化应激,降低炎症水平等生物学效应,从而改善胰岛素抵抗。因此,EPO是胰岛素抵抗乃至糖尿病治疗有潜在应用前景的药物之一。