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本研究以异育银鲫为对象从生长、饲料利用、免疫应答、抗病力、肠道形态和肠道微生态六方面入手，通过饲喂方法探讨几种免疫增强剂（左旋咪唑、灵芝葡聚糖提取物和壳聚糖）及溶菌酶对异育银鲫的影响。实验主要包括(1)饲料中左旋咪唑对异育银鲫生长、饲料利用、非特异性免疫及抗嗜水气单胞菌能力的影响;(2)饲料中灵芝葡聚糖提取物对异育银鲫生长、饲料利用、免疫力及抗嗜爱德华氏菌能力的影响;(3)饲料中壳聚糖对异育银鲫的生长、饲料利用、免疫应答、肠道形态、肠道微生态及抗嗜水气单胞菌能力的影响;(4)饲料中溶菌酶对异育银鲫的生长、饲料利用、免疫应答、肠道形态、肠道微生态及抗嗜水气单胞菌能力的影响。
本研究的主要结果如下:
(1)在饲料中添加100mg/kg，250mg/kg，500mg/kg，1000mg/kg，1500mg/kg的左旋咪唑，配制成6种等氮(32.00％)、等脂(8.74％)、等能(18.09kJ/g)的实验饲料，探求左旋咪唑对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)(5.13±0.11g)生长、饲料利用及免疫应答的影响。结果表明不同剂量的左旋咪唑的添加在第21天(D21)，第44天(D44)，第60天(D60)的不同的取样时间内，对异育银鲫的生长，摄食率，饲料效率，均无产生显著影响(P＞0.05)。在D21时，不同剂量的左旋咪唑的添加对异育银鲫的脏体比、肝体比和肥满度均无显著影响(P＞0.05）。在D44时，随着左旋咪唑添加量的升高，异育银鲫的肝体比和肥满度有着先下降后升高的趋势（P＜0.05），肝体比在添加量为250mg/kg时最低，肥满度在添加量为500mg/kg时最低。左旋咪唑添加量对异育银鲫的脏体比无显著影响(P＞0.05)。D60日不同浓度的左旋咪唑的添加对异育银鲫的脏体比，肝体比和肥满度均无显著影响(P＞0.05)。在D21时，随着左旋咪唑剂量添加的增高，血清抗菌活力呈先上升后下降的趋势，在添加量为250mg/kg时血清抗菌活力达到最高(P＜0.05）;血清溶菌酶活力呈先上升后下降的趋势，在添加量为1000mg/kg最高(P＜0.05);血清超氧化物歧化酶活力没有显著影响。在D44时，血清溶菌酶的活力随着左旋咪唑的含量增高而增高，在100mg/kg添加量时最高，之后随着添加量的升高，溶菌酶活力趋于平稳，但仍高于对照组;随着左旋咪唑的含量增高，血清超氧化物歧化酶的活力有着先上升后下降的趋势(P＜0.05），在添加量为250mg/kg时，血清SOD酶活力达到最高(P＜0.05)。在D60时，血清抗菌活力和血清溶菌酶活力仍呈先上升后下降的趋势，但各组之间差异不显著。异育银鲫在D60时经嗜水气单胞菌后的死亡率，随着左旋咪唑的使用剂量的升高，有着先升高后降低的趋势。且在添加量为500mg/kg时，异育银鲫的死亡率最低(P＜0.05）。因此，实验周期为65d时，饲料添加左旋咪唑推荐添加剂量为500mg/kg。
(2)在饲料中添加0.6％和3％的灵芝葡聚糖提取物，配制成3种等氮(37.91％)、等脂(9.09％)、等能(16.68kJ/g)的饲料，设计5种不同处理分别为:对照饲料投喂65日(0％-65d);0.6％灵芝葡聚糖提取物饲料投喂65日(0.6％-65d);3％灵芝葡聚糖提取物饲料投喂65日(3％-65d);0.6％灵芝葡聚糖提取物饲料投喂21日后改投对照饲料44日(0.6％-21d，0％-44d);3％灵芝葡聚糖提取物饲料投喂21日投对照饲料44日(3％-21d，0％-44d)。通过生长实验探求饲料中添加灵芝葡聚糖提取物饲料对异育银鲫(6.72±0.11g)生长、饲料利用及免疫应答的影响，以及停止灵芝葡聚糖提取物饲料后，使用效果的持续性。在实验进行的第21(D21)，第46天(D46)，第65天(D65)进行取样，结果表明所有的灵芝提取物组的特定生长率在饲喂65天后与对照组无显著差异(P＞0.05）。摄食率随着灵芝提取物在饲料中含量的增加而增加(P＜0.05)，摄食率则有着相反的趋势(P＜0.05)。在D46和D65时，随着灵芝提取物的含量增高，吞噬活力略有增高，但无显著差异（P＞0.05）。在D21、D46和D65时，呼吸爆发活力随着灵芝提取物的含量增高而增高（P＜0.05），在D21时，(0.6％-21d，0％-44d)处理组和(3％-21d，0％-44d)处理组其呼吸爆发活力高于对照组(P＜0.05）。在D65时，(0.6％-21d，0％-44d)处理组和(3％-21d，0％-44d)处理组其呼吸爆发活力仍高于对照组（P＞0.05），但差异不显著。D21、D46和D65时，替代途径补体溶血活力随着灵芝提取物的增高而降低(P＜0.05)。所有处理组溶菌酶活力在D21时没有产生显著差异。在D46时，对照组溶菌酶活力比最高添加组低但高于低添加组(P＜0.05），(3％-21d，0％-44d)处理组也仍高于对照组(P＜0.05）。在D65时，所有添加组的溶菌酶活力均低于对照组(P＜0.05)。在D65时，髓过氧化物酶活力随着灵芝提取物的添加剂量升高而升高(P＜0.05)，(0.6％-21d，0％-44d)处理组仍高于对照组(P＜0.05)。灵芝葡聚糖提取物的能提高白细胞呼吸爆发活力，且在在高剂量摄入21天后(D46时)，仍可以保持较高的活力，说明灵芝葡聚糖提取物对免疫应答有一定时间延续效应。随着灵芝提取物添加量的升高，异育银鲫在经爱德华氏菌攻毒后的存活率显著提高。最高存活率组为3％添加组，显著高于对照组(P＜0.05）。本实验中，实验周期为65d时，饲料中灵芝葡聚糖提取物推荐添加剂量为3％。
(3)在饲料中添加0.18％、0.4％、0.75％、1％、2％的壳聚糖，配制成6种等氮(38.34％)、等脂(9.75％)、等能(16.68kJ/g)的实验饲料，探求壳聚糖对异育银鲫中科3号(4.80±0.01g)生长、饲料利用及免疫应答的影响。每隔25d取样，实验周期为75d。结果表明，饲料中添加0.4％壳聚糖能提高异育银鲫的特定生长率(P＞0.05)。随着壳聚糖添加量升高，异育银鲫血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)的含量显著降低(P＜0.05）。壳聚糖促进了脂类代谢，但对鱼体粗脂肪没有产生显著影响(P＞0.05）。饲料中添加壳聚糖能显著提高异育银鲫的白细胞吞噬率(PA)及呼吸爆发活力(ROS)(P＜0.05)，且有着剂量-时间效应。在D75时，添加量0.4％壳聚糖显著降低异育银鲫血清丙二醛(MDA)含量(P＜0.05），显著提高溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、替代途径补体溶血活力(ACH)(P＜0.05)，及嗜水气单胞菌攻毒后的存活率(P＜0.05)。0.4％添加壳聚糖显著提高中肠杯状细胞(GC)和上皮内淋巴细胞(IEL)数量，同时提高后肠中微绒毛的高度(MH)和密度(MD)(P＜0.05）。壳聚糖能改变肠道微生物区系，在D75时，增加放线菌门(Actinobacterium)菌群的数量并减少了嗜水气单胞菌属(Aeromonas)的数量。实验周期为75d时，饲料添加壳聚糖推荐添加剂量为0.4％。
(4)在饲料中分别添加100、500和1000mg/kg的溶菌酶，配制成4种等氮(36.70％)、等脂(6.20％)、等能(17.92kJ/g)的实验饲料，探求饲料溶菌酶对异育银鲫中科3号(3.43±0.01g)生长、饲料利用、肠道形态、肠道微生态及免疫应答的影响。每隔25d取样，实验周期为75d。结果表明，异育银鲫的特定生长率和饲料效率随着饲料中溶菌酶添加而升高，1000mg/kg的溶菌酶添加能显著提高特定生长率和饲料效率(P＜0.05)。饲料中添加溶菌酶能显著降低了异育银鲫的白细胞吞噬率(PA)及溶菌酶活力(LZM)(P＜0.05)。溶菌酶添加在各取样时间段没有影响血清呼吸爆发活力(ROS)、替代途径补体溶血活力(ACH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活力和丙二醛(MDA)含量(P＞0.05)。500mg/kg的溶菌酶添加显著提高异育银鲫经嗜水气单胞菌攻毒后的存活率(P＜0.05）。攻毒后PA、ROS、SOD、LZM和ACH活力随着溶菌酶添加显著提高，MDA则有着相反的趋势(P＜0.05）。添加溶菌酶显著提高中肠中杯状细胞(GC)和后肠中微绒毛的高度(MH)(P＜0.05）。溶菌酶改变肠道微生物区系，且所有溶菌酶添加组在攻毒后依然可检测到芽孢杆菌。本实验中，饲料添加溶菌酶推荐添加剂量为500mg/kg。
总之，在饲料中添加适宜的左旋咪唑、灵芝葡聚糖提取物、壳聚糖不会影响异育银鲫的生长和饲料利用，添加适宜的溶菌酶还能促进异育银鲫的生长和饲料利用;本论文中所有的添加剂均能提高异育银鲫的免疫应答和抵抗病菌的能力，并且饲料中添加壳聚糖和溶菌酶还能改善异育银鲫的肠道微生态区系和肠道形态。