【摘 要】
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管网水中存在大量的细菌,但传统的培养法用于饮用水中的微生物计数或种类鉴定存在众多弊端。本文首先基于流式细胞术(Flow cytometry. FCM)研究北京市城区12处管网水中细菌的
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管网水中存在大量的细菌,但传统的培养法用于饮用水中的微生物计数或种类鉴定存在众多弊端。本文首先基于流式细胞术(Flow cytometry. FCM)研究北京市城区12处管网水中细菌的稳定性;其次,基MiSeq测序技术比较分析北京市城区和郊区管网水样细菌多样性特征;最后,对12处城区水样进行病原微生物的定量研究,其中结合FCM和MiSeq测序技术估算条件致病菌的数量,利用超滤系统、膜过滤洗脱和离心过滤三步浓缩100L(每个采样点)管网水,富集轮状病毒,并用PMA-qPCR法对活性轮状病毒进行定量检测。取得的主要结果如下:异养菌平板计数法(Heterotrophic plate count. HPC)FCM对比进行细菌计数发现,HPC法测得细菌数为0-23 CFU/mL,而FCM计数结果为2.2×103~1.6×104 cells/mL;细菌总数在22℃下培养7天能再生长到106~107 cells/mL;细菌总数随用水量的多少表现出相应的变化。本研究表明,FCM的细菌计数明显优于HPC法,且能够快速准确地反映细菌的再生长及短时间内细菌的稳定性特征。对比北京市城区和郊区水样细菌多样性结果发现,变形菌门(Proteobacteria)是丰度最高的门,在城区水样中约占总OTU数量的42.3%-76.9%,郊区水样占55.5%-87.6%。总体上看,城区水样中的细菌种类少,但复杂程度高,其差异显著物种以常见水体细菌居多。郊区水样中核心菌群更为明显,细菌多样性高,未被归类的OUT数量少,差异物种中有较多的肠道菌和致病菌。测序发现条件致病菌,分枝杆菌属(Mycobacterium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)和假单胞菌属(Pseudomonas),其丰度结合FCM的计数可估算细菌数量,在一定程度上解决了FCM难以鉴定细菌种类而MiSeq测序不能计数的难题。另外,三种浓缩方法的结合能有效地富集管网水中的轮状病毒,其中样本B、G、J有阳性检出。条件致病菌和活性轮状病毒的定量检测为评估饮用水的健康风险和预防胃肠疾病暴发提供数据支持。
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