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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,全球每年发病人数超过100万。乳腺癌已经成为妇女健康的很大威胁。与其他类型肿瘤一样,乳腺癌在临床治疗过程中很容易发生药物耐药,严重影响患者的临床治疗疗效。乳腺癌的耐药机制很复杂,其中药物代谢酶的作用是重要的因素。GSTπ是主要Ⅱ相药物代谢酶之一,以往的研究表明,它与多种抗肿瘤药物的耐药相关,GSTπ与烷化剂耐药的相关性已经有诸多的研究,并有肯定的结论。GSTπ表达与紫杉类药物耐药的相关性至今没有明确结论,因此,本研究建立了GSTπ高表达的乳腺癌细胞株,体外观察不同GSTπ表达水平的乳腺癌细胞株对紫杉类化疗药物敏感性或耐药性;通过免疫组化的方法检测乳腺癌患者肿瘤组织中GSTπ表达水平,回顾性对比分析紫杉类化疗药物临床治疗效果及治疗转归与乳腺癌组织中GSTπ表达水平的相关性,以期对复发转移乳腺癌合理治疗提供实验室的证据。 第一部分研究,利用PCR方法从pET17B—GSTP1—1质粒中扩增获得人GSTP1—1基因全序列,再将扩增产物插入到表达载体pcDNATM3.1/V5-HisB中,获得pcDNATM3.1—GSTP1重组体,通过基因转染方式导入乳腺癌细胞株中,进行诱导表达。实现了GSTπ基因的克隆,获得不同GSTπ表达水平的乳腺癌细胞,从而为在体外情况下研究GSTπ参与药物代谢和药物耐药,以及未来的耐药拮抗剂和依赖GSTπ转化前体药物的研究提供可能,为肿瘤内科学的临床治疗、临床药理学的研究提供更多的研究手段。 第二部分研究,体外观测GSTπ表达与紫杉类药物耐药的关系。利用已建立的GSTπ不同表达水平的细胞株,通过体外细胞学对比观察研究GSTπ高表达细胞株与对照组细胞株对肿瘤细胞紫杉醇用药敏感性的影响。研究结果表明乳腺癌细胞对紫杉类药物的敏感性与GSTπ表达水平呈显著负相关(P<0.05)。提示GSTπ的表达可作为影响含紫杉类药物化疗方案疗效不佳的预测因子,是预测化疗敏感性的有用指标。 第三部分临床研究,临床紫杉类药物治疗晚期乳腺癌疗效与GSTπ的相关性