主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）是指在基因组上的一组相关联的基因位点聚集而成的高度不保守的基因座。MHC大量聚集于脊椎动物体内，其编码的蛋白质称为主要组织相容性抗原，在免疫功能中发挥巨大的作用，如能够控制移植排斥反应，参与免疫应答以及免疫调节等。根据分子结构、组织分布及功能上的特点，主要组织相容性复合体包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类。其中，MHC Ⅱ类分子是由两条跨膜型糖蛋白链组成，分别称为α链和β链，它们之间以非共价键相连组成，非常的不保守。在构成上MHCⅡ类分子包含抗原表位沟槽区、免疫球蛋白家族区、跨细胞膜区和细胞质区4个部位。禽类的MHC基因又叫作B复合体，存在于禽类的第16号微小染色体上。根据家禽的MHC基因所表达的蛋白质的不同，现在把家禽的B复合体分子分为B-F、B-L、B-G三类分子。其中B-L蛋白质主要帮助外源性抗原到底APC表面，和哺乳动物的MHCⅡ蛋白质具有相似的功能。B-L蛋白质的基因也是由B-LA和B-LB组成，其中编码B-LB编码β链蛋白、B-LA编码α链蛋白，二者通过非共价键形成二聚体。本课题就是研究表达鸡MHCⅡ-β分子的B-LB。相对于Ⅰ类分子分布的广泛性，Ⅱ类分子的分布范围比较窄，主要分布在B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和DC等某些专职抗原提呈细胞表面，还少量分布于精子细胞以及个别活化的T细胞表面。MHCⅡ分子的主要功能是递呈外源性抗原片段，通过形成MHCⅡ-抗原肽复合物诱导和激活特异性的免疫应答。为了进一步研究鸡MHCⅡ类分子两条肽链在递呈抗原及免疫应答中的作用，尤其是较为多态性的鸡MHCⅡ-β链在鸡MHCⅡ中的作用，本课题采用分子生物学技术和细胞生物学技术，对MHCⅡ-β链基因（B-LB）进行了克隆和真核表达，成功建立了恒定表达鸡MHCⅡ-β链基因的细胞株。首先，从GenBank中查获禽类MHCⅡ-链基因数据，然后根据pEGFP-N1的MCS切位点和禽类的MHCⅡ-链基因序列分别设计一对引物。同时从鸡MHCⅡ-链基因的332bp处到792bp处设计一对检测引物，用于检测细胞株的稳定性。从鸡脾淋巴细胞中抽提核糖核苷酸，然后进行反转录，最后利用特异性引物扩增出MHCⅡ-链(792bp)的全长基因；利用特异性的限制性内切酶对PCR产物和载体进行双酶切，然后将这两个酶切后的片段连接得到所需要的重组载体pEGFP-N1/B-LB。使用脂质体转染法瞬时转染了COS7细胞（非洲绿猴肾成纤维细胞）和稳定转染了P815(小鼠肥大瘤细胞)，经瞬时转染的COS7细胞，在荧光显微镜下，可以清楚的看到MHCⅡ-链定位在内膜系统上。经稳定转染的p815细胞在利用G418筛选并传代10次后，利用特异性的检测引物经RT-PCR检测，成功得到了目的条带461bp。结果表明本实验成功地得到了鸡MHC Ⅱ-链基因并成功构建了pEGFP-N1/B-LB真核表达重组质粒，获得了稳定表达绿色荧光蛋白GFP-鸡MHCⅡ-融合蛋白的小鼠肥大细胞瘤P815细胞株，为针对MHCⅡ的抗肿瘤免疫学药物的药效评价建立了肿瘤细胞模型，同时为进一步研究鸡MHCⅡ的结构与功能奠定了基础。