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当今防治缺血再灌注(I/R)损伤已成为冠状动脉粥样硬化性心脏病治疗亟待解决的重要问题,研究发现缝隙连接通讯参与I/R损伤的作用。以缝隙连接为靶点的抗缺血再灌注损伤可能是一个新的心肌保护的研究方向。庚醇(Heptanol)作为缝隙连接阻滞剂,对抗I/R的损伤保护机制并不清楚,尤其是对线粒体Cx43介导心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用尚未见国内外文献报道。因此,本课题建立心肌细胞缺氧/复氧模型(AR),应用庚醇预处理,检测线粒体Cx43含量变化及其细胞凋亡情况,并比较缺血预处理及后处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤心肌细胞线粒体Cx43的影响。目的通过对细胞膜及线粒体Cx43表达变化的研究,在亚细胞水平探讨不同浓度庚醇(Heptanol)预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用机制。方法用出生1-3天的SD乳鼠进行原代心肌细胞培养,随机分为7组:正常对照组(control组),缺氧/复氧组(AR组),溶酶组(DMSO组),0.1mmol/L庚醇预处理组(0.1HT组),0.5mmol/L庚醇预处理组(0.5HT组),1.0mmol/L庚醇预处理组(1.0HT组),2.0mmol/L庚醇预处理组(2.0HT组)。Control组,不进行缺氧/复氧处理以及HT药物干预。AR组,对培养的心肌细胞进行缺氧/复氧处理30分钟,然后在正常条件下培养箱内孵育120分钟;DMSO组,在心肌细胞培养瓶中加入与HT组等量DMSO,进行缺氧/复氧处理;其它各组加入相应浓度(0.1mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.0mmol/L)的庚醇预处理,再予以缺氧/复氧处理。采用RT-PCR技术从转录水平检测Cx43mRNA表达水平变化。提取线粒体,用Western blot检测线粒体Cx43蛋白含量。结果AR组较control组的Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量明显减少(P<0.01)。1.0 HT组、2.0HT组与AR组相比较,Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量明显增加(P<0.01)。0.1HT组及0.5 HT组与AR组相比较,Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量无明显差异(P>0.05)。结论庚醇预处理可以逆转AR导致的细胞膜及线粒体Cx43的减少,但作用效果与浓度有关。线粒体Cx43可能参与了庚醇预处理的心肌保护作用。目的在亚细胞水平比较庚醇预处理、缺血预处理及缺血后处理对线粒体Cx43介导的大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤作用机制。方法用出生1-3天的SD乳鼠进行原代心肌细胞培养,随机分为6组:正常对照组(control组),缺氧/复氧组(AR组),溶酶组(DMSO组),缺氧预处理组(HP组),缺氧后处理组(PC组),庚醇预处理组(HT组)。Control组,不进行缺氧/复氧处理以及HT药物干预。AR组,对培养的心肌细胞进行缺氧/复氧预处理30分钟,然后更换正常培养液,在正常条件下培养箱内孵育120分钟;DMSO组,在心肌细胞培养瓶中加入与HT组等量DMSO溶剂,进行缺氧/复氧处理;HP组,先予以心肌细胞缺氧预处理,再进行缺氧/复氧处理;PC组先予以缺氧/复氧处理,再予以缺氧后处理;HT组,在培养瓶中加入1.0mmol/L庚醇,再予以缺氧/复氧处理。用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。采用RT-PCR技术从转录水平检测Cx43mRNA表达水平变化。提取线粒体,用Western blot检测线粒体Cx43蛋白含量。结果AR组、DMSO组相较于control组心肌细胞凋亡率明显增加(P<0.01),Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量明显减少(P<0.01)。HP组、PC组和HT组与AR组相比较,心肌细胞凋亡率减小(P<0.01),Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量明显增加(P<0.01)。与HP组、PC组相比较,HT组心肌细胞凋亡率、Cx43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量无明显差异(P>0.05)。结论庚醇预处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用可能通过影响心肌细胞线粒体Cx43的表达实现其保护效果,与缺氧预处理及后处理相似。