乙型肝炎病毒剪接蛋白 HBSP与肝细胞UXT的相互作用及对NF-κB通路的影响

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由HBV前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)经过特异的剪接并逆转录产生的亚基因组DNA,称为HBV基因组剪接变异体(spliced variants of hepatitis B virus genomes)。基因片段大小为2.2 kb的单剪接型(剪接位点为2447nt-489nt)HBV剪接变异体在所有的HBV剪接变异体中占80%以上,可编码特异性剪接蛋白(Hepatitis B spliced protein,HBSP),并与病毒的持续性感染及致病性相关。本实验室先前利用酵母双杂交系统筛查肝细胞中与HBSP蛋白相互作用的细胞蛋白,获得泛转录表达因子(Ubiquitously expressed transcript protein,UXT),该蛋白包含两个异构体UXT-V1及UXT-V2。本研究在酵母双杂交系统初步筛查的基础上,进一步验证HBSP蛋白与UXT的相互作用,并探讨其生物学意义。本研究第一部分旨在证实HBSP与UXT蛋白间的相互作用。为此,构建了pAcGFP-N1-UXT-V1和pAcGFP-N1-UXT-V2重组质粒(用于激光共聚焦)、进行了免疫共沉淀、激光共聚焦以及哺乳动物细胞双杂交实验,结果证实HBSP蛋白可以和UXT-V1相互作用,而与UXT-V2可能不存在相互作用。本研究的第二部分旨在探讨HBSP是否通过与UXT-V1的相互作用对NF-κB启动子活性产生影响。为此,以NF-κB启动子荧光素酶报告载体转染表达HBSP的肝癌细胞株并以TNF-α处理。结果发现HBSP能增强NF-κB启动子活性,且该效应部分是通过与UXT-V1的相互作用而实现的。
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