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固有性免疫应答在机体抗病毒感染中起着重要的作用，表达在免疫细胞的模式识别受体(pattern recognition receptor，PRR)通过识别病原体的保守分子结构即病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern，PAMP)，启动一系列信号转导途径诱导保护性细胞因子如Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)和前炎症细胞因子的表达，发挥直接抑制病毒复制的作用，并调节适应性免疫应答。Toll-样受体(Toll-like receptor，TLR)是PRR的一种，与抗病毒作用有关的TLR包括TLR3、7、9，如TLR3能识别存在于病毒基因组或病毒复制时产生的dsRNA，TLR7和TLR8能识别富含GU序列的ssRNA病毒，TLR9则识别病毒基因的CpG-ODN。除TLR外，存在于细胞浆中的RNA解旋酶如视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ，RIG-Ⅰ)和黑素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation-associated gene 5，MDA5)也能识别dsRNA，并诱导Ⅰ型干扰素(IFN-α和IFN-β)和前炎症细胞因子的表达。HBV和HCV常引起持续感染并导致慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌。IFN-α／β在抗慢性病毒感染中发挥重要作用，研究表明HBV和HCV可通过不同的机制抑制IFN-α／β的诱导或拮抗IFN-α／β的生物学活性，可能与HBV和HCV持续感染有关。HBV的核心蛋白抑制IFN-β的转录，HCV的NS3／4A蛋白阻断仙台病毒诱导的IRF-3的活化，从而阻断IFN-β的表达。然而迄今HBV和HCV感染诱导肝脏局部产生IFN-α／β的机制尚不清楚。目的：本研究通过RT-PCR方法以及定量PCR方法检测人正常肝细胞株L02细胞、肝癌细胞株SMMC7721和HepG2细胞与抗病毒固有性免疫应答有关的受体表达以及不同PAMP刺激诱导细胞表达IFN-β的情况，以了解肝细胞对病毒PAMP的固有性免疫应答特性，研究肝细胞内的固有性抗病毒免疫途径，为阐明HBV、HCV慢性感染发生机制提供理论基础，同时为研究慢性病毒性肝炎的治疗提供新的策略。方法：1．肝细胞表面固有性免疫识别受体及信号转导蛋白的检测：设计和合成TLR3、TLR7、TLR8、TLR9、RIG-I、MDA5、MyD88及TRIF特异性引物，采用RT-PCR方法检测L02、SMMC7721和HepG2细胞是否表达相应的受体或蛋白。2．肝细胞对不同病毒PAMP刺激的反应性：取对数生长期细胞，ployI：C以0μg／ml、25μg／ml、50μg／ml直接或用以0μg／ml、2.5μg／ml、5μg／ml转染，刺激细胞6h；polyU以0μg／ml、1μg／ml、2μg／ml转染，刺激细胞24h；CpG-ODN以0μg／ml、10μg／ml、20μg／ml刺激细胞36h。每组2孔。刺激后提取细胞总RNA并逆转录为cDNA，荧光定量PCR检测IFN-β的表达。结果：1．人肝细胞固有性免疫识别受体及其信号转导蛋白的表达：L02细胞表达TLR3、TLR7、TLR9、MDA5、MyD88和TRIF，SMMC7721表达TLR3、TLR7、TLR9、MDA5和MyD88，HepG2表达TLR3、TLR7、TLR8、TLR9、MDA5和MyD88。2．PAMP刺激肝细胞后IFN-β的表达：(1)polyI：C刺激组：除高剂量(50μg／ml)刺激HepG2组外，经polyI：C刺激后，L02、SMMC7721、HepG2细胞IFN-β的表达显著增高(P＜0.05)，不同剂量组之间无显著性差异(P＞0.05)。(2)polyI：C转染组：polyI：C转染细胞后，与对照组相比，L02细胞中IFN-β的表达水平显著增高(P＜0.05)，不同刺激浓度之间无显著差异(P＞0.05)；SMMC7721和HepG2细胞中IFN-β的表达无显著差异(P＞0.05)。(3)polyU转染组：polyu转染细胞后，与对照组相比，L02细胞中KEN-β的表达水平无显著增高(P＞0.05)，SMMC7721中IFN-β的表达显著增高(P＜0.05)，且与刺激剂量有关(P＜0.05)，HepG2细胞中IFN-β的表达无显著差异(P＞0.05)。(4)CpG-ODN刺激组：CpG-ODN以高剂量(20μg／ml)刺激后，L02细胞中IFS-β的表达显著增高(P＜0.05)，且与低剂量(10μg／ml)相比也显著增高(P＜0.05)，SMMC7721和HepG2中IFN-β的表达无明显差异(P＞0.05)。结论：人肝细胞表达固有性免疫识别受体如TLR3、TLR7、TLR9、MDA5以及信号转导蛋白如MyD88、TRIF。不同的PAMP如polyI：C、polyU以及CpG-ODN可通过相应的受体诱导不同的肝细胞株表达IFN-β，提示正常肝细胞可能在抗病毒固有性免疫应答中起着重要的作用，进一步研究肝细胞抗HBV、HCV感染固有性免疫应答特性以及HBV／HCV的调节作用，有利于阐明HBV、HCV慢性感染的发生机制，并为慢性病毒性肝炎提供新的治疗策略。