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双酚A(BPA)和苯并[a]芘(BaP)是典型的环境污染物,也是典型的内分泌干扰物。它们广泛存在于人们的日常生活中,与人类接触的机会比较多,可能对人体健康造成潜在危害。因此,系统研究BPA和BaP的毒性效应具有重要的理论和现实意义。本论文利用斑马鱼胚胎作为实验材料,首先分别用不同浓度的BPA(0、5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L)和BaP(0、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.15 mg/L、0.2 mg/L)对斑马鱼胚胎进行急性暴露(96 h),通过体式显微镜观察记录斑马鱼胚胎的死亡率、孵化率、心率和畸形情况,从生理学层面揭示BPA和BaP对斑马鱼胚胎的生长发育毒性;然后通过比较不同暴露条件下斑马鱼胚胎4种候选内参基因(gapdh、ef1α、β-actin和rp17)的mRNA表达变化,筛选出BPA或BaP暴露下的最适内参基因,为后续目的基因相对表达量的分析奠定基础;最后,采用实时荧光定量PCR方法检测雌激素受体基因(ERα、ERβ1)以及抗氧化酶基因(SOD、CAT、GPX)的表达量,并利用试剂盒测定斑马鱼胚胎抗氧化酶(T-SOD和CAT)的活力,以进一步反映BPA和BaP暴露对斑马鱼胚胎的毒性效应。实验结果如下:首先,BPA和BaP暴露96 h时,两种污染物均可提高斑马鱼胚胎的死亡率,降低孵化率。但是,BPA和BaP对心率的影响是不同的。随着BPA浓度的增加,心率下降,而BaP治疗组的变化趋势却相反。同时,BPA暴露后观察到明显的发育畸形,包括脊柱弯曲和尾部弯曲。其次,通过NormFinder、geNorm和BestKeeper 3种分析软件,对斑马鱼胚胎的4种候选内参基因(gapdh、ef1α、β-actin和rp17)的稳定性进行了评价,结果显示rp17是暴露于BPA和BaP的斑马鱼的最佳内参基因。然后,通过实时定量PCR检测暴露于BPA和BaP 96 h时的斑马鱼胚胎中雌激素受体基因(ERα和ERβ1)的mRNA表达。随着BPA暴露浓度的升高,ERαmRNA表达量呈现先升高后下降的趋势,而ERβ1 mRNA表达量则极显著下降(p<0.01);随着BaP暴露浓度的升高,ERαmRNA和ERβ1 mRNA表达量极显著下降(p<0.01)。最后,在暴露于BPA和BaP 96 h时的斑马鱼胚胎中检测了抗氧化酶的mRNA表达和活性。结果表明,抗氧化酶基因CAT和GPX的mRNA表达量随着BPA和BaP的暴露浓度的升高逐渐下降;而抗氧化酶基因SOD的mRNA表达量随着BaP的暴露浓度的升高逐渐升高,在BPA中则相反。相应地,BPA暴露后,T-SOD和CAT的活性下降。同时,高剂量BaP暴露可增强T-SOD活性,BaP暴露后可降低CAT,这与mRNA水平的变化一致。综上所述,急性BPA、BaP暴露,可升高斑马鱼胚胎的死亡率、降低孵化率,影响心率,导致胚胎发育畸形,下调雌激素受体基因(ERα、ERβ1)转录表达,调控抗氧化酶(SOD、CAT和GPX)的基因表达及活性,从而影响斑马鱼胚胎的生长发育并引起内分泌干扰效应和氧化损伤。