猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗的研制与免疫效力研究

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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)是造成断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,而副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPs)是Glasser’s病的病原菌,二者常混合感染,给养猪业造成巨大的经济损失。免疫预防是控制这两种疾病的主要手段之一。目前均有商品化灭活疫苗使用,但猪圆环病毒、副猪嗜血杆菌二联灭活苗尚未见报道。国内外研究证明,PCV2ORF2编码的结构蛋白(Cap),可以诱导机体产生较高水平的抗体,对机体具有很好的免疫保护作用。本课题基于实验室已成功构建并获得的重组杆状病毒表达PCV2Cap蛋白(BCap).将副猪嗜血杆茵血清5型(HPs5)灭活茵液,分别与BCap蛋白、PCV2灭活病毒液混合制备成二联苗,接种PCV2、HPs阴性断奶仔猪,研究其对免疫接种猪的安全性与免疫保护力。具体研究内容如下:将BCap (4mg/mL)和PCV2灭活病毒液(1O5.0TCID50/mL),分别与HPs5灭活抗原(5×109CFU/mL)混合,与GEL佐剂配制成二联灭活疫苗。将35头28日龄的健康仔猪随机分为4组:BCap/HPS5免疫组(10头)、iPCV2/HPs5免疫组(10头)、攻毒对照组(10头)、空白对照组(5头)。免疫组分别肌肉注射上述制备的两种疫苗。免疫后4周分别用HPs5(2×109CFU/mL)、PCV2SH株(105.0TCID50/mL)攻毒,隔离饲养观察,分别于攻毒后14天、28天剖杀。免疫后定期采血检测ELISA抗体水平。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、相对日增重、病毒血症、解剖时病理变化及显微病变等指标评价疫苗效果。结果为:①免疫后28天,所有免疫猪均产生了针对HPs或PCV2的抗体;②PCV2和PRRSV攻毒后,攻毒对照组猪平均体温高于免疫组,免疫组猪仅出现短时间的发热,无明显临床症状;各组猪平均体重均升高,两免疫组相对日增重高于攻毒对照组但与空白对照相似(P>0.05);攻毒后14天,攻毒对照组猪血清的病毒血症明显高于两免疫组(P<0.05);Real-time PCI检测淋巴结中的PCV2,结果表明两免疫组猪的淋巴结病毒载量相似,且明显低于攻毒对照组(P<0.05);两免疫组猪的剖检病理变化和病理组织学变化都明显轻于攻毒组对照组;③HPs5攻毒后,两免疫组猪仅出现短时间的发热,无明显临床症状;相对日增重高于攻毒对照组但与空白对照相似(P>0.05);两免疫组在剖检病理变化和病理组织学变化方面相似,但明显轻于攻毒组对照组。本研究表明,BCap/HPs5与iPCV2/HPs5二联苗免疫猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并在一定程度上能够抵抗PCV2与HPs对猪体的感染,对猪体有一定的免疫保护作用。
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