论文部分内容阅读
第一部分目的 探讨全反式维甲酸（all-trans-retinoicacid,ATRA）对小细胞肺癌细胞的诱导分化作用。方法 细胞培养至对数生长期，给予不同浓度不同时间的全反式维甲酸诱导分化，MTT法检测细胞体外增殖能力，电镜形态学的观察，流式细胞仪进行细胞周期分析，角蛋白表达作为检测小细胞肺癌分化的特异性指标，RT-PCR法维甲酸受体亚型基因分析。结果 全反式维甲酸浓度为 20μmol/L, 10μmol/L, 5μmol/L，2.5μmol/L, 1.25μmol/L时诱导分化小细胞肺癌NCI-H446细胞株，24小时 OD值分别为0.498,0.502,0.503,0.507,0.510，各浓度间无显著性差别（P>0.05）；48小时 OD值分别为0.292, 0.342,0.467,0.498,0.521, ATRA20μmol/L与5μmol/L有显著性差别（P<0.01）； 72小时 OD值分别为0.206,0.312, 0.415, 0.482，0.509，ATRA20μmol/L与10μmol/L有显著性差别（P<0.05）；96小时 OD值分别为0.189,0.251,0.380,0.487,0.506。由此可见随浓度的增加，作用时间的延长，OD值降低，活细胞数目减少，细胞存活力明显下降； 在一定的药物浓度范围内，经过一定的作用时间，ATRA对细胞的抑制增殖作用呈量效关系，ATRA10μmol/L为最佳药物浓度，<WP=10>ATRA干预最佳时间为72h。 ATRA10μmol/L诱导分化细胞24h,48h,72h,凋亡形成率为4.9%, 8.8%, 11.45%; 而对照组为4.08%, 4.10%, 4.18%。72h二组有显著性差别（P<0.05）,更多的细胞被阻止于G1/G0期,提示静止期细胞增多，DNA合成受到抑制。药物组光镜可见细胞增殖减慢，细胞折光性减弱，胞质中可见空泡，细胞形态不规则，细胞间空隙增大。透射电镜观察细胞内超微结构可见细胞核明显变小，核/浆比值减少，细胞核成分叶状，部分细胞核固缩，染色质浓集，呈凋亡细胞特征，并可见凋亡小体。免疫组化检测角蛋白表达明显下降，提示细胞向良性分化；RT-PCR电泳结果进行计算机图象分析，测定各条带的灰度值，药物组RARβ,RXRα为143.58,78.89; 对照组为105.33,45.37。显示维甲酸诱导分化后受体亚型RARβ,RXRα基因表达上调。结论 全反式维甲酸分化诱导能使小细胞肺癌NCI-H446细胞株维甲酸受体基因表达上调，并有效的抑制细胞的增殖。