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第一部分雌激素通过mTOR/caspase-3途径对白介素-1β在诱导大鼠髓核细胞凋亡中的作用
目的：椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration，IVDD)是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。mTOR是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路mTOR是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白mTOR的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用相关通路蛋白抑制剂(雷帕霉素)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了mTOR蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。应用cleavedcaspase-3蛋白表达量进行验证。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，在Westernblot实验中，E2还可以增加磷酸化mTOR的相对表达量，同时减少caspase3酶活性和cleavedcaspase-3的蛋白表达水平。加入mTOR的通路抑制剂，雷帕霉素,有效的减弱了17β-雌二醇的细胞保护作用，增加了NPCs的早期凋亡率(9.85%±0.38%)。并且降低了磷酸化mTOR的相对表达量，增加了caspase3酶的活性和cleavedcaspase-3的蛋白表达量。
结论：雌激素通过mTOR/caspase-3信号通路抑制了由白介素1β诱导的NPCs凋亡；
第二部分雌激素通过GSK-3β/caspase-3途径对白介素-1β在诱导大鼠髓核细胞凋亡中的作用
目的：椎间盘退变是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。GSK-3β是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路GSK-3β是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白GSK-3β的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用各相关通路蛋白抑制剂(SB216763)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了GSK-3β蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，在Westernblot实验中，IL-1β增加了磷酸化GSK-3β的相对表达量。加入信号通路GSK-3β抑制剂SB216763，不能减弱17β-雌二醇的细胞保护作用。髓核细胞的早期凋亡率(7.32%±0.47%)和caspase3酶的活性未发生相应的变化。而磷酸化的GSK-3β蛋白相对表达水平并未发生预期的变化。
结论：
1.信号通路GSK-3β/caspase-3未参与雌激素抑制由白介素1β诱导的NPCs凋亡。
2.信号通路GSK-3β可能在白介素1β诱导的NPCs凋亡的过程中发挥作用。
第三部分雌激素通过NF-κB/caspase-3途径对白介素-1β在诱导大鼠髓核细胞凋亡中的作用
目的：椎间盘退变是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。NF-κB是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的三种下游信号通路，并确定哪些途径与雌激素抑制NPCs凋亡的作用有关。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路NF-κB是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白NF-ΚB(P65)的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用相关通路蛋白抑制剂(SC75741)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了NF-ΚB(P65)蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，加入信号通路NF-κB抑制剂SC75741，不能抑制17β-雌二醇的细胞保护作用。同时降低了髓核细胞的早期凋亡率(7.76%±0.48%)和caspase3酶的活性。而磷酸化的P65蛋白相对表达量并未随着雌激素和通路抑制剂的加入而发生相应的变化。
结论：信号通路NF-κB/caspase-3未参与雌激素抑制由白介素1β诱导的NPCs凋亡。
目的：椎间盘退变(Intervertebral disc degeneration，IVDD)是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。mTOR是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路mTOR是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白mTOR的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用相关通路蛋白抑制剂(雷帕霉素)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了mTOR蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。应用cleavedcaspase-3蛋白表达量进行验证。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，在Westernblot实验中，E2还可以增加磷酸化mTOR的相对表达量，同时减少caspase3酶活性和cleavedcaspase-3的蛋白表达水平。加入mTOR的通路抑制剂，雷帕霉素,有效的减弱了17β-雌二醇的细胞保护作用，增加了NPCs的早期凋亡率(9.85%±0.38%)。并且降低了磷酸化mTOR的相对表达量，增加了caspase3酶的活性和cleavedcaspase-3的蛋白表达量。
结论：雌激素通过mTOR/caspase-3信号通路抑制了由白介素1β诱导的NPCs凋亡；
第二部分雌激素通过GSK-3β/caspase-3途径对白介素-1β在诱导大鼠髓核细胞凋亡中的作用
目的：椎间盘退变是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。GSK-3β是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路GSK-3β是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白GSK-3β的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用各相关通路蛋白抑制剂(SB216763)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了GSK-3β蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，在Westernblot实验中，IL-1β增加了磷酸化GSK-3β的相对表达量。加入信号通路GSK-3β抑制剂SB216763，不能减弱17β-雌二醇的细胞保护作用。髓核细胞的早期凋亡率(7.32%±0.47%)和caspase3酶的活性未发生相应的变化。而磷酸化的GSK-3β蛋白相对表达水平并未发生预期的变化。
结论：
1.信号通路GSK-3β/caspase-3未参与雌激素抑制由白介素1β诱导的NPCs凋亡。
2.信号通路GSK-3β可能在白介素1β诱导的NPCs凋亡的过程中发挥作用。
第三部分雌激素通过NF-κB/caspase-3途径对白介素-1β在诱导大鼠髓核细胞凋亡中的作用
目的：椎间盘退变是脊柱退行性疾病的主要病理基础。髓核细胞的异常凋亡是导致椎间盘退变的主要诱因。有报道称雌激素通过激活蛋白激酶B(PKB/Akt)途径发挥抗细胞凋亡作用。在我们前期的研究中，发现17β-雌二醇(E2)通过PI3K/Akt信号通路保护大鼠NPCs免受白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的凋亡。然而，PI3K/Akt的下游信号通路尚不清楚。NF-κB是PI3K/Akt下游途径中的重要通道蛋白。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的三种下游信号通路，并确定哪些途径与雌激素抑制NPCs凋亡的作用有关。本研究旨在探讨PI3K/Akt途径的下游信号通路NF-κB是否与雌激素抑制大鼠NPCs凋亡的作用有关。
方法：本研究是以白介素1β诱导NPCs凋亡为模型。在雌激素抑制NPCs凋亡过程中，观察信号通路蛋白NF-ΚB(P65)的相对活化水平与细胞早期凋亡率和细胞活性之间的关系,应用相关通路蛋白抑制剂(SC75741)，从反面验证。CCK-8法确定不同时间点各实验组和对照组之间NPCs的细胞增殖率变化趋势，寻找出最佳处理时间。应用MTS法加以验证。细胞黏附试验用来检测各组中NPCs与Ⅱ型胶原的黏附能力。采用AnnexinⅤ/PI双重染色法确定各实验组和对照组中NPCs早期凋亡率。Westernblot实验测定了NF-ΚB(P65)蛋白质及其磷酸化表达水平。Caspase3酶活性检测实验验证了各组中caspase3酶的活化水平。
结果：雌激素抑制了由IL-1β细胞毒性引起的细胞增殖率、细胞活力和黏附能力的降低，并且降低了IL-1β诱导的NPCs的早期凋亡率。此外，加入信号通路NF-κB抑制剂SC75741，不能抑制17β-雌二醇的细胞保护作用。同时降低了髓核细胞的早期凋亡率(7.76%±0.48%)和caspase3酶的活性。而磷酸化的P65蛋白相对表达量并未随着雌激素和通路抑制剂的加入而发生相应的变化。
结论：信号通路NF-κB/caspase-3未参与雌激素抑制由白介素1β诱导的NPCs凋亡。