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色胺酮(tryptanthrin,TRYP),吲哚喹啉类生物碱,最初由产蓝植物中得到,具抗炎、抗真菌、抗肿瘤等药理活性。研究发现,色胺酮可以抑制与哮喘发生、发展密切相关的白三烯、前列腺素、NO、NOS等炎性介质的生成,但色胺酮是否对哮喘有治疗作用尚未见文献报道。本课题采用多种药理学方法,探讨色胺酮对哮喘的治疗作用及其作用机制。1实验目的观察色胺酮对哮喘的治疗作用,探讨其作用机制,为色胺酮治疗哮喘提供理论依据。2实验方法2.1复制急性哮喘动物模型并比较各组豚鼠哮喘潜伏期2.1.1急性哮喘豚鼠模型复制及评价采用磷酸组胺雾化吸入法建立急性哮喘豚鼠模型;结合病理切片观察动物行为,评价该模型是否成功复制。2.1.2给药前后潜伏期分析模型复制成功后,给药组灌胃1w,再次激发哮喘发生,记录并比较各组给药前后哮喘发生潜伏时间。2.2复制慢性哮喘动物模型并检测豚鼠体内NO、NOS、IFN-γ、IL-4水平2.2.1慢性哮喘豚鼠模型复制及评价采用粗卵蛋白腹腔注射法致敏,通过雾化吸入卵蛋白生理盐水稀释液,激发哮喘建立动物模型;结合病理切片观察动物行为,评价该模型是否成功复制。2.2.2 NO、NOS、IFN-γ、IL-4水平检测采用硝酸还原酶法测定豚鼠血清、BALF中NO含量;化学法测定豚鼠血清中NOS含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测豚鼠BALF中IFN-γ和IL-4水平。2.3检测慢性哮喘豚鼠肺组织中NOS、COX-2水平采用免疫组化染色法,对豚鼠肺组织进行NOS、COX-2免疫组化染色,色胺酮及地塞米松干预后,观察NOS、COX-2蛋白在豚鼠肺组织中的表达。3实验结果3.1潜伏期比较色胺酮70mg/kg、35mg/kg剂量组,给药后哮喘潜伏期(125.8s±16.3s,157.1s±23.6s)较给药前(55.6s±7.3s,56.1s±9.5s)延迟一倍以上,与模型组(给药前58.4s±8.7s,给药后59.4s±7.4s)对比有显著差异(P<0.05);病理切片观察:色胺酮给药各组肺部急性轻度炎症,模型组肺部急性中度炎症。3.2色胺酮对豚鼠体内NO、NOS、IFN-γ、IL-4水平影响豚鼠血清中:色胺酮各剂量组及地塞米松组NO含量分别为(66.12±4.86)nmol/l、(70.85±5.32)nmol/l、(74.45±6.03)nmol/l、(65.71±6.01)nmol/l,较模型组(98.12±10.12)nmol/l含量显著降低(P<0.05);色胺酮各剂量组及地塞米松组NOS含量分别为(0.62±0.03)u/ml、(0.67±0.04)u/ml、(0.71±0.05)u/ml、(0.51±0.02)u/ml,较模型组(0.87±0.05)u/ml含量显著降低(P<0.05)。豚鼠BALF中:色胺酮各剂量组及地塞米松组NO含量分别为(7.05±2.05)nmol/L、(8.44±2.33)nmol/L、(9.31±2.65)nmol/L、(6.83±1.43)nmol/L,较模型组(13.57±2.12)nmol/L含量显著降低(P<0.05);色胺酮各剂量组及地塞米松组IFN-γ水平分别为(854.94±80.86)pg/ml、(739.08±54.32)pg/ml、(576.45±68.03)pg/ml、(506.71±70.01)pg/ml,较模型组(423.12±43.34)pg/ml,IFN-γ水平显著降低(P<0.05);色胺酮各剂量组及地塞米松组IL-4水平分别为(9.05±2.39)ng/l、(13.14±2.19)ng/l、(19.31±1.45)ng/l、(15.63±1.76)ng/l,较模型组(43.66±2.27)ng/l水平显著升高(P<0.05)。3.3色胺酮对豚鼠肺组织中NOS、COX-2蛋白表达影响豚鼠肺组织检测中:各干预组及模型组NOS蛋白表达阴性;空白组及地塞米松组COX-2蛋白表达阴性,色胺酮各组及模型组COX-2表达阳性。4结论4.1色胺酮可延迟豚鼠哮喘发作,缓解体内炎症。4.2色胺酮可降低哮喘豚鼠体内炎性因子NO、NOS含量。4.3色胺酮可降低哮喘豚鼠BALF中IFN-γ水平,提高IL-4水平,维持Th1/Th2细胞因子平衡。