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目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSCs)联合布洛芬(ibuprofen)修复大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的效果,探讨布洛芬对hUC-MSCs存活和分化的影响。
方法:移植所用第5代hUC-MSCs由天津协和干细胞基因工程有限公司提供,倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞仪对其进行表型鉴定。取8周龄雌性Wistar大鼠80只,随机分为4组:DMEM移植空白对照组(A),布洛芬腹腔注射组(B),hUC-MSCs移植组(C),布洛芬联合hUC-MSCs组(D),每组20只,利用Impactor ModelⅡ打击器制作T10脊髓损伤模型。各组于移植后1天、3天以及每周最后一天(至第8周)随机选取8只大鼠,对其进行BBB评分(BBBscale,Basso,Beattie&Bresnahan locomotor rating scale)评估后肢运动功能恢复情况。各组于移植后第8周随机选择5只大鼠处死,取动物损伤段脊髓做5μm石蜡切片,通过MAB1281(Mouse anti-human nuclei monoclonalantibody,小鼠抗人细胞核单克隆抗体)免疫组织化学染色观察hUC-MSCs的存活情况;通过NF-200(Neurofilament Protein200,神经丝蛋白)免疫组织化学染色观察hUC-MSCs分化情况。免疫组化染色的数字图像用Image Pro Plus6.0显微图像分析软件处理,比较各组阳性反应面积,结果以x±s表示。组间BBB评分和免疫组化阳性反应面积均数的比较均采用单因素方差分析,进一步组间的两两比较采用SNK(Student-Newman-Keuls)法。采用SPSS16.0统计软件包完成数据分析,均以双侧检验P<0.05为差异有统计学意义。
结果:P5代的hUC-MSCs在镜下观察可见其形态规则、大小均一、呈漩涡状生长。hUC-MSCs细胞表面抗原表型为:CD73、CD105、Anti-HLA-ABC阳性,CD34、CD45、Anti-HLA-DR阴性,符合间充质干细胞的表型特征。行为学评分结果显示,移植细胞5周起,布洛芬联合hUC-MSCs组(D) BBB评分明显高于其他组,并一直持续至第8周。第8周时布洛芬联合hUC-MSCs组(D)评分为(14.91±2.46)分,明显高于布洛芬腹腔注射组(B)(10.57±2.31)、hUC-MSCs移植组(C)(11.91±1.88),差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,术后第8周可观察到布洛芬联合hUC-MSCs组(D)的hUC-MSCs存活数量多于其他治疗组;NF-200染色面积联合治疗组(D)(0.28±0.05)明显高于布洛芬腹腔注射组(B)(0.11±0.04)、hUC-MSCs移植组(C)(0.18±0.06),差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:联合应用布洛芬和hUC-MSCs移植治疗脊髓损伤,其效果好于单纯hUC-MSCs移植。布洛芬可以促进人脐带间充质干细胞在损伤部位存活并使其易于向神经样细胞分化,二者联合移植可以明显促进损伤后轴突再生和脊髓功能恢复。