滋阴固本方对急性EAE大鼠的防治作用及对脊髓内Nogo-A蛋白表达的影响

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目的:多发性硬化(MS)是中枢神经系统(CNS)常见的自身免疫性疾病,因实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠(EAE)模型的发病情况及病理生理变化与MS的表现一致,临床公认使用EAE模型作为MS的动物实验模型,本实验通过EAE模型的制作,观察滋阴固本方对急性EAE大鼠脊髓损伤后Nogo-A蛋白表达的影响,结合神经功能损害评分,及脊髓损伤后HE染色的病理变化,进一步探讨滋阴固本方对急性EAE大鼠脊髓损伤的保护机制,为滋阴固本方的临床应用提供实验理论依据。方法:雌性wistar大鼠72只,数字表随机分为6组:空白组、模型组、激素组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组12只。采用新鲜豚鼠脊髓匀浆再加完全弗氏佐剂作为免疫抗原,接种到雌性waster大鼠四肢真皮足垫下,并注射百日咳原液增加血脑脊液屏障通透性,建立EAE模型。模型制备成功后观察各组大鼠体重、饮食量和神经行为学变化并进行相应的评分;行苏木精-伊红染色观察脊髓组织的病理变化;用免疫组化(sp)法检测脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达情况。结果:1.体重及神经行为学评分空白组大鼠无异常神经行为学改变。EAE模型组大鼠注射免疫抗原后7天左右渐出现饮食量减少、饮水量增加、伴有体重下降、大小便失禁、四肢瘫痪等显著的神经行为学改变;与模型组相比,激素组及中药高、中、低剂量组在第9天左右逐渐出现神经行为学的改变,14天左右症状最为明显,模型组与各治疗组体重变化相比差异有统计学意义(p<0.05)。治疗组各组神经行为评分低于模型组,激素组与中药高、中剂量无明显差异(p>0.05),中剂量与高剂量相比无明显差异(p>0.05),模型组与激素组及中药高、中、低剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。2.病理变化结果空白组大鼠脊髓组织未见炎性细胞浸润、髓鞘脱失等改变;模型组大鼠脊髓组织可见明显的炎性细胞的浸润,呈袖套样改变,伴有神经细胞的空泡变性,及神经元的皱缩,血管周围有髓鞘的脱失,伴有轴索的肿胀、变性及胶质细胞增生,与模型组相比,治疗组各组的病理变化都有所改善,炎性细胞数明显减少,无明显的细胞变性,髓鞘脱失的病灶明显减少,脊髓组织细胞排列相对整齐。3. Nogo-A免疫组织化学结果Nogo-A蛋白是轴突再生抑制因子,其阳性表达为棕黄色的物质,位于神经元细胞、少突胶质细胞的胞浆内,在机体的神经系统自我修复时伴随少突胶质细胞的增生而大量释放。模型组可见Nogo-A蛋白的表达呈强阳性,与之相比,激素组与中药高、中、低剂量Nogo-A蛋白的表达相对减少。治疗组各组间激素组与中药高剂量之间无明显差异(p>0.05),中药高剂量与中剂量之间有明显差异(p<0.05),中药中剂量与低剂量之间有明显差异(p<0.05)。结论:1.本实验成功建立了多发性硬化的动物实验模型。2.滋阴固本方预防性的治疗急性期EAE大鼠,明显减少了发病率,延缓了其发病时间;3.滋阴固本方减轻了EAE大鼠脊髓组织的炎性变化,有效的控制了EAE大鼠的体重下降情况,并在急性期对轴突生长抑制因子(Nogo-A)的表达有明显抑制作用,使受损的神经系统得到良好的修复;4.高剂量的滋阴固本方与醋酸泼尼松对Nogo-A表达的抑制作用无明显差异,而高剂量与中剂量相比有显著差异,因此临床对多发性硬化的中药治疗疗效与剂量有一定相关性。
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