荧光原位杂交技术检测反应器中微生物实验条件优化的研究

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本研究利用荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)法检测反应器中的目标菌群:如聚磷菌,硝化细菌等;确定实验操作步骤和较好的检测条件并用FISH法对厌氧氨氧化菌进行摸索性实验。经过对影响杂交试验结果的几个主要因素的研究比较,初步优化了检测条件,得出以下结论:⒈聚磷菌液较好的预处理条件和杂交条件为:⑴样品在抹片前应先经过1倍磷酸盐缓冲液离心清洗两次。⑵FISH法检测反应器样本中聚磷菌的实验条件:杂交温度46℃,杂交时间2h,洗脱液中NaCl浓度70mmol/L。⒉检测生物膜中硝化细菌时,较好的预处理条件和杂交条件为:⑴样品在热固定前不需1×PBS清洗。⑵检测生物膜中硝化细菌的实验条件:①硝酸细菌:杂交温度46℃,杂交时间5h,洗脱液中NaCl浓度55mmol/L。②亚硝酸细菌:杂交温度46℃,杂交时间3h,洗脱液中NaCl浓30~40 mmol/L。⒊对厌氧氨氧化细菌检测的初步优化条件:⑴切片后经由50%、80%、99%三级脱水步骤可获得较好效果。⑵黏附液中明胶与硫酸钾铬配比为10:1。⑶包埋时液体石蜡与污泥的配比为1:10。
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