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海甘蓝(Crambe abyssinica)是十字花科海甘蓝属植物,种子含油量为34.48%,其中芥酸含量为55%-62.50%。海甘蓝的种子油通常在工业上广泛应用。由于海甘蓝属于海甘蓝属且自花授粉植物,不用担心与芸薹属植物串粉而影响食用,因此可以通过转基因技术将其培育成为新型工业油料作物。本论文探讨了海甘蓝下下胚轴和子叶柄再生与转化体系的建立以及转基因过程中一些重要因素对转化再生的影响。首先我们探讨了卡那霉素对未转化海甘蓝苗的影响。随着卡那霉素的浓度提高,白化苗的比例呈上升趋势。接种15天和30天后卡那霉素浓度间差异都显著。在同一卡那霉素浓度下,时间越长,白化比例越高,只有5mg/L和10mg/L卡那霉素浓度有些意外。可能是此卡那霉素浓度较低,有些组培苗已适应了此卡那浓度。因此我们建议转化筛选时,卡那霉素浓度应高于10mg/L。研究表明NAA对于海甘蓝下胚轴转化再生影响显著。NAA为0.2mg/L时再生频率最高,之后随着NAA浓度升高,再生频率逐渐下降。将ZT从0mg/L提高到3mg/L,下胚轴再生频率有所提高；进一步提高ZT浓度再生频率则下降。TDZ为8mg/L时再生频率相对较高。适度提高6-BA浓度,下胚轴再生频率略有提高,进一步提高则会使再生频率大幅降低。统计分析表明ZT、TDZ和6-BA对下胚轴转化再生影响不显著。下胚轴长度对转化再生频率影响显著。下胚轴越短,转化再生频率越高。卡那霉素对下胚轴转化再生影响显著。卡那霉素浓度越高,下胚轴转化再生频率越低。综合考虑出芽频率和筛选效果,我们选择16mg/L卡那霉素作为下胚轴转化再生筛选压力,出芽后经过连续的筛选淘汰,最后均为阳性植株。AgNO3为0.5mg/L时下胚轴转化再生频率相对较高,但统计分析表明AgN03和活性菌液添加AS对下胚轴转化再生影响不显著。下胚轴预培养时间对下胚轴分化的影响显著。预培养2天转化再生频率最高,预培养时间太长或太短都不利于转化再生。农杆菌侵染时间对海甘蓝下胚轴的分化频率影响显著,侵染时间越长下胚轴转化再生能力降低。随着在共培养基中添加AS浓度的增加,下胚轴转化再生频率有所提高。统计分析表明AS浓度、农杆菌菌液浓度、不同浓度Cef/Car配比和pH值对下胚轴转化再生频率的影响不显著。6-BA对子叶柄转化再生影响显著。6-BA不利于子叶柄转化再生,6-BA浓度越高,转化再生频率越低。NAA浓度增加到1.5mg/L时,子叶柄转化再生频率达到最高,但更高的NAA则会降低转化再生频率。较高浓度的TDZ可以获得较高的转化再生频率统计软件分析表明NAA, TDZ和ZT对子叶柄芽转化再生影响不显著。卡那霉素对子叶柄转化再生频率影响显著。卡那霉素浓度为8mg/L时分化最高,之后随着卡那霉素浓度增加,子叶柄转化再生频率逐渐降低。综合考虑出芽频率和筛选效果,我们选择10mg/L卡那霉素浓度作为子叶柄转化筛选压力,出芽后逐渐提高筛选压力。AgNO3对子叶柄芽转化再生影响显著。AgN03为1mg/L时,子叶柄转化再生频率最高,再提高AgN03浓度则会降低转化再生频率。统计软件分析表明侵染时间、预培养和共培养时间对子叶柄转化再生影响不显著。对反复筛选后获得的具有Kan抗性T0代组培苗进行PCR,鉴定大量的阳性植株。将已经PCR鉴定的植株重新抽提DNA,去胶纯化。收集浓缩的DNA进行Southern blot,鉴定出一批阳性植株。利用海甘蓝下胚轴和子叶柄作为材料,将提高海甘蓝种子油中芥酸和蜡酯含量的载体导入海甘蓝中,获得大批转基因再生植株,为今后海甘蓝的利用奠定了坚实的基础。