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抗生素在治疗人类细菌感染及防治畜禽疾病等方面发挥了重要作用。但随着抗生素的大量及不合理应用，耐药菌株种类不断增多、数量不断上升，严重威胁了动物和人类的生命健康，研制和筛选新型抗菌制剂，一定程度上代替传统抗生素，是目前亟待解决的问题。家蝇抗菌肽等抗菌活性物质因具有毒性低且不易使病原菌产生耐药性的特点而成为目前研究的热点。家蝇（Musca domestica）及其幼虫长期暴露于恶劣的环境中却很少染病，表明其具有较强适应恶劣环境的能力[1-3]，而这种能力源于其体内存在的抗菌活性物质等活性成分。家蝇体内的抗菌活性物质一般包括抗菌肽、凝集素、几丁质、粪产碱菌、有机化合物和尿囊素，除此之外还有一些未知功能蛋白。本研究以从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库（SSH）中筛选得到差异基因为基础，通过通过cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends，RACE）对一未知功能基因（unknown functional gene of Musca domestica简称Md-UF1）进行扩增，产物测序分析。通过T-A克隆技术，将全长PCR产物克隆至pMD18-T Vector中，成功构建出阳性克隆质粒Md-UF1-pMD18-T。将Md-UF1、Md-UF2、MddⅠ基因亚克隆至pET-32a(+)中，构建出重组表达质粒Md-UF1-pET-32a、Md-UF2-pET-32a、MddⅠ-pET-32a，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳分析。利用镍离子金属鳌合亲和层析介质（Ni-NTAAgarose）对融合蛋白进行纯化，并将融合蛋白进行抑菌活性分析，主要实验结果如下：1、扩增出Md-UF1基因全长ORF序列531bp。生物信息学分析其疏水性较强，理论分子量为18.938ku、理论等电点为8.23。无明显跨膜区，不属于膜蛋白或分泌蛋白，存在信号肽区域，二级结构以α–螺旋、不规则盘绕和延伸链为主要结构元件，少量β–折叠结构散布在整个蛋白质中。2、成功构建了重组表达质粒Md-UF1-pET-32a、Md-UF2-pET-32a、MddⅠ-pET-32a，并在大肠杆菌中获得了表达。表达蛋白主要为不可溶性蛋白，以包涵体形式存在。融合蛋白的最佳表达条件分别为Md-UF1：IPTG浓度0.4mM，25℃诱导4h；Md-UF2：IPTG浓度0.4mM，30℃诱导6h；MddⅠ：IPTG浓度0.4mM，30℃诱导6h。3、纯化得到比较单一的融合蛋白，其抑菌实验结果表明Md-UF1-pET-32a、Md-UF2-pET-32a、MddⅠ-pET-32a融合蛋白均对临床分离的猪源链球菌耐药株具有明显的抑制作用，Md-UF1-pET-32a、Md-UF2-pET-32a融合蛋白对临床分离的鸡源大肠杆菌、鸡伤寒沙门氏菌耐药株有抑制作用，而MddⅠ-pET-32a融合蛋白对其抑制作用不明显；三种融合蛋白均对猪肺炎支原体具有抑制作用。上述实验结果，为进一步研究这三种融合蛋白抗菌活性机制奠定基础，为临床寻找新型抗菌药物提供依据。