本试验旨在研究不同的培养方法、基础培养基、细胞因子、肝素钠、温度、氧分压等因素对昆明小鼠胚胎干细胞建系的影响，筛选了昆明小鼠胚胎干细胞的最佳培养条件，并以此为基础建立了携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的小鼠胚胎干细胞系。　　 试验利用两种不同的培养体系（KSR和N2B27）建立昆明小鼠胚胎干细胞。结果在KSR的培养体系中小鼠胚胎干细胞集落贴壁状态生长，生长较缓慢，边缘细胞分化脱落，最高传代为6代；在N2B27培养体系中细胞集落呈悬浮状态生长，生长较快，边缘光滑整齐，连续传7代未见分化。　　 采用N2B27基本培养体系。研究不同基础培养液（高糖DMEM、knockout DMEM、DMEM/F12、TCM-199）、细胞因子（LIF、bFGF、EGF）、两种药物（SU5402、肝素钠）、温度和气相环境等因素对昆明小鼠胚胎干细胞的影响。结果表明，基础培养基knockout DMEM和DMEM/F12优于高糖DMEM和TCM-199；LIF对小鼠胚胎干细胞生长具有明显的促进作用(P<0.01)；bFGF、EGF、肝素钠对小鼠胚胎干细胞有一定的促进作用(P<0.05)；SU5402对小鼠胚胎干细胞没有明显的促进作用(P>0.05)；温度39℃比37℃更有利于小鼠胚胎干细胞的快速增殖，氧分压20% O2较氧分压5% O2有利于小鼠胚胎干细胞的建系。　　 以N2B27系统为条件，采用卵周隙注射携带GFP基因的慢病毒载体法感染早期小鼠胚胎，再将转染小鼠胚胎接种在N2B27胚胎干细胞培养体系，经过培养获得携带GFP转基因的昆明小鼠胚胎干细胞。