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目的: 1.研究术后疲劳综合征(Postoperative Fatigue Syndrome,POFS)大鼠模型AMPK信号通路影响蛋白质代谢相关分子变化规律。 2.观察在应用人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1)干预后,AMPK信号通路上影响蛋白质代谢相关分子变化特点。 方法: 1.实验动物 SPF级SD雄性青年大鼠,体重(200-300g),北京维通利华实验动物有限公司(SCXK(京)2006-0009)。 2.方法和检测指标将雄性SD大鼠,称重标号随机分为假手术对照组(C组),POFS模型组(M组)和人参皂苷Rb1干预组(R组)。每组再按时间点分为术后1、3、5、7天组,C组和M组大鼠分别在术前3天分别到取材当天,每天腹腔注射1次4ml/kg体重的生理盐水,R组大鼠在相同条件下腹腔注射4ml/kg体重的人参皂苷Rb1,人参皂苷Rb1用生理盐水配置成3.75g/L的溶液现配现用。通过Real-time PCR检测术后第1、3天组大鼠肝脏组织和骨骼肌AMPK信号通路中ACC1,ACC2,FOXO1,MURF1,EEF2,p70s6k mRNA表达量的变化。通过Western Blot检测术后1、3、5、7天组ACC,FOXO1,MURF1,EEF2,p70s6k蛋白表达。 采用Spss19统计软件进行统计分析,实验数据以均数±标准差(z±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),P<0.05是认为差异有统计学意义。 结果: 1.MURF1 mRNA表达量变化 与C组比,M组骨骼肌MURF mRNA表达量升高(1d、3d,P<0.05); R组与M组比,注射人参皂苷Rb1后骨骼肌MURF mRNA表达量降低(1d、3d,P<0.05),而肝组织中则无上述变化。如图1.1,1.2。 2.FOXO1 mRNA表达量变化 与C组比,M组骨骼肌FOXO1 mRNA表达量升高(1d、3d,P<0.05);R组与M组比,注射人参皂苷Rb1后骨骼肌FOXO1 mRNA表达量降低(1d、3d,P<0.05),而肝组织中则无上述变化。如图1.3,1.4。 3.EEF2、p70S6KmRNA表达量变化 3.1 骨骼肌中:EEF2、p70S6K mRNA相对表达量M组相对于C组升高(1d、3d,P<0.0.5),应用人参皂苷Rb1干预后R组相对于M组降低(1d,3d,P<0.0.5)。如图1.5,1.6,1.7,1.8。 3.2 肝脏中:EEF2、p70S6KmRNA相对表达量M组相对于C组升高(1d、3d,P<0.0.5),应用人参皂苷Rb1干预后R组相对于M组降低(1d、3d,P<0.0.5)。如图2.1,2.2,2.3,2.4。 4.ACC1、ACC2 mRNA表达量变化 4.1 在骨骼肌中:ACC1、ACC2 mRNA相对表达量M组相对于C组增加(1d,P<0.0.5),R组相对于M组降低(1d,P<0.0.5)。如图1.9,1.10。 4.2 在肝脏中:ACC1、ACC2 mRNA相对表达量,M组相对于C组升高(1d,P<0.0.5),应用人参皂苷Rb1干预后R组相对于M组升高(1d,P<0.0.5);ACC1、ACC2 mRNA相对表达量M组相对于C组降低(3d,P<0.0.5),应用人参皂苷Rb1干预后R组相对于M组降低(3d,P<0.0.5)。如图2.5,2.6,2.7,2.8。 5.Western blotting结果 结果显示ACC蛋白表达量随时间(1d、3d、5d、7d)延长而增加。相对于C组,M组大鼠骨骼肌ACC蛋白表达在术后明显升高,相对于M组,R组蛋白表达下降。而ACC/P-ACC蛋白表达量,M组最高,R组少于M组。FOXO1蛋白表达量随时间(1d、3d、5d、7d)延长而增加,而P-FOXO1蛋白表达量随时间(1d、3d、5d、7d)延长而减少。C组、M组、R组FOXO1蛋白表达量,M组最高,R组少于M组。如图3.2。EEF2、p70S6K蛋白表达量。C组、M组、R组EEF2、p70S6K蛋白表达量,M组高于C组,R组未见明显差别(1d、3d、5d、7d)。如图3.3。 结论: 1.术后疲劳综合征大鼠相关分子的表达相对于假手术对照组表达有一定规律,骨骼肌通过MURF1、FOXO1、EEF2、p70S6K、ACC1、ACC2表达量变化,抑制蛋白质的合成和促进降解,减少能量消耗。肝脏通过EEF2、p70S6K、、ACC1、ACC2表达量变化,调控蛋白质的合成与降解,从而减少能量消耗。 2.应用人参皂苷Rb1干预后通过相关分子的表达调控来影响蛋白质代谢的合成和降解。