剑麻斑马纹病病原菌分离鉴定、生物学特性观察及防控药剂筛选

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斑马纹病是剑麻生产上的毁灭性病害,其致病菌为烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)。烟草疫霉通过气孔或外界因素造成的伤口侵染剑麻叶片,在叶片上形成叶斑、茎腐和轴腐三种病状,因其病斑似斑马纹状故称其为斑马纹病。斑马纹病会造成麻田大量缺株、减产甚至绝收,严重影响着剑麻产业的健康发展。
  作者对中国广东、广西、云南和海南等四个剑麻主栽区进行了斑马纹病病害调查,广泛采集病样分离病原菌,从病原菌的生物学特性及化学防治两个方面展开研究,以期为剑麻斑马纹病的综合防控及抗病育种提供理论依据。
  本研究的主要结果如下:
  1、病害调查及病原菌分离:中国的四个剑麻H.11648主栽区均有斑马纹病发生,其中广东省的发病情况最为严重,海南省剑麻主栽区发病最轻。通过采集发病区病样,然后利用组织分离法分离病原菌,共获得了纯化菌株50株。
  2、病原菌致病性测定:以浓度为106个/mL的饱子悬浮液为接种体,采用刺伤法、注射法和喷雾法等方法接种剑麻叶片,用透明塑料袋罩住保湿。结果表明:刺伤接种法简便高效,叶片接种部位均出现典型的斑马纹病斑。另外,刺伤法、注射法和喷雾法三种方法的发病率分别为100%、70.6%和0%。
  3、病原rDNA-ITS序列分析:利用通用引物ITS1和ITS4对分离到的50株病原分离菌进行PCR扩增,50个参试菌株的ITS长度均为900bp左右,经NCBI的Blast比对,50株分离菌株都是烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)。将ITS序列导入MEGA6.0软件中构建系统发育树。
  4、烟草疫霉孢子悬浮液制备:本文采用菌丝丛加无菌水、菌丝块加无菌水及皮氏液加土壤浸出液三种方法诱导产孢。试验结果表明,菌丝块加无菌水诱导产孢所需时间较短,产孢量大,游动孢子释放较为集中。
  5、参试菌株生物学特性测定:对本研究所分离得到的烟草疫霉的生物学特性研究结果表明,培养基pH值为3.0-10时菌丝均可生长,最适pH值为7.0;菌丝在PDA、10%V8、PSA、OMA和玉米培养基上均可生长,最适合的培养基为10%V8培养基;菌丝在含不同碳氮源培养基上的生长速度存在差异,最适碳源为蔗糖,最适氮源为硝酸钾;菌丝致死温度为50℃,10min。
  6、杀菌剂的室内毒力测定:选用5种新型杀菌剂,采用菌落生长速率测定5种杀菌剂对烟草疫霉的抑制作用。经SPSS分析后发现不同杀菌剂的抑制效果不同,效果最好的杀菌剂为烯酰吗啉,其EC50为1.147mg/L,EC95为5.016×100mg/L;在智能生物显微镜下观察菌丝,发现烟草疫霉经烯酰吗啉处理后菌丝会逐渐膨大,然后断裂。
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