慢病毒介导hVEGF-165基因转染骨髓间充质干细胞治疗大鼠后肢缺血实验研究

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目的:检测分析携人血管内皮生长因子-165基因骨髓间充质干细胞对大鼠缺血后肢的治疗效果,为下肢缺血的临床治疗提供新思路。方法:本实验设立三个实验组,分别为转染hVEGF-165基因BMSC组、BMSC组、空白对照组,每组有效样本8例,共48条肢体。采用结扎SD大鼠腹主动脉分叉处上方建立缺血模型,并通过术后观察、DSA血管造影、测股动脉血流速度及阻力检测鉴定;通过慢病毒介导hVEGF-165基因转染大鼠骨髓间充质干细胞,GFP荧光蛋白标记,荧光显微镜下检测hVEGF-165基因转染率;再采用大鼠后肢肌肉多点注射方法将1X106/ml浓度的干细胞移植到缺血的肢体内,一个月后通过观察、DSA血管造影、测股动脉血流速度及血流阻力检测疗效。结果:1、荧光显微镜下检测慢病毒介导hVEGF-165基因转染BMSCs阳性率可达85%以上;2、采用结扎腹主动脉法制作缺血模型,术后30天所有大鼠出现跛行,足趾坏死,绝大部分大鼠肢体出现缺血性溃疡。彩色多普勒超声、后肢血管造影等检查显示结扎术后实验大鼠后肢血流、阻力指数显著下降,血管密度显著减少。3、移植术后30天检测疗效,大鼠后肢血流速度、阻力指数与微血管密度转基因BMSC组、BMSC组均明显高于空白对照组,而转基因BMSC组高于BMSC组(p<0.01)。结论:慢病毒载体介导hVEGF-165基因转染BMSC阳性率高;采用SD大鼠腹主动脉分叉处上方结扎法制作后肢缺血模型缺血效果明显,持续时间长;相同移植条件下的携hVEGF-165基因BMSCs、单纯BMSCs均能改善缺血后肢的血供,但转染hVEGF165基因BMSCs促血管新生能力更有优势。
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