粟酒裂殖酵母Mrzl蛋白的定位及对线粒体蛋白翻译影响的研究

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线粒体是真核生物中重要的细胞器,参与了许多细胞功能,包含通过氧化磷酸化(OXPHOS)产生三磷酸腺苷(ATP)、氨基酸和脂肪酸合成、动物凋亡和衰老过程。粟酒裂殖酵母是研究线粒体基因表达的有吸引力的模式生物。在粟酒裂殖酵母中,线粒体基因组(mtDNA)是紧凑的,~19kb的线性DNA。它编码了 OXPHOS复合体的主要亚基,如细胞色素b-c1复合体(复合体m)亚基3(Cob1也称Cob或Cytb),细胞色素c氧化酶(复合体Ⅳ或COX)亚基1,2,3(Cox1,2,3)和ATP合酶(复合体V)亚基(ATP6,8,9)。除此之外,S.pombe mtDNA编码了线粒体核糖体蛋白(Var1),线粒体核糖体的大小亚基(rnl和 rns),25tRNAs 和 RNaseP 的 RNA 亚基。Mrz1蛋白是一个功能未知的蛋白,在本文中,我们主要研究了粟酒裂殖酵母中Mrz1蛋白在细胞中的定位与功能。通过构建△mrz1菌株,发现△mrz1基因缺失后在发酵型培养基上能够正常生长,在半乳糖或甘油的非发酵型碳源培养基上表现出生长缺陷,意味着Mrz1蛋白与线粒体的功能密切相关。通过提取线粒体后进行定位实验,发现Mrz1蛋白是一个线粒体外膜蛋白。通过实时荧光定量PCR,可以得出mrz1基因的缺失没有影响线粒体基因组编码的mRNA的积累。另外,利用[35S]-methionine/cysteine mix 标记和 Western blot 实验检测 Mrz1 蛋白对线粒体基因组编码的蛋白水平的影响。我们发现mrz1基因缺失后线粒体基因组编码的蛋白能够正常合成,而线粒体基因组编码的蛋白Cob1、Cox1、Cox2、Cox3的稳定性受到了严重的影响,意味着Mr1蛋白对于线粒体基因组编码的蛋白的稳定性有着重要作用。mrz1基因缺失后,线粒体基因组编码的蛋白正常合成后由于不稳定而随之被降解,从而影响了线粒体呼吸链复合体的组装,导致了线粒体氧化磷酸化不能正常进行,使得线粒体功能受损。
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