PI3K-AKT信号通路是最具胰岛素敏感性的信号通路之一,前人对其进行了较为广泛的研究,揭示其可参与细胞的生长、发育、分化等过程。多项研究表明,PI3K-AKT信号通路可以调节一些动物前体脂肪细胞的成脂分化过程,但在家兔的成脂分化过程中,作用尚不明确。为此,本实验旨在探究AKT2基因在家兔前体脂肪细胞分化过程中的作用。实验结果如下:本实验摘取新西兰初生仔兔肾周的白色脂肪组织,并利用?型胶原酶分离得到前体脂肪细胞,进行原代培养。用鸡尾酒法诱导成脂分化后,对分化过程的0、8d进行油红O染色,发现随着培养时间的延长脂滴逐渐增多、变大;同时利用qRT-PCR对脂肪细胞分化的标志基因进行定量检测,结果发现,在分化的过程中,PPARγ、C/EBPα在分化的第2d表达量极显著升高,第5d和第8d时表达量极显著降低。FABP4在分化的第5d极显著上调表达。根据NCBI上家兔AKT2基因序列,合成了siRNA1、siRNA2、siRNA3三组siRNAs对AKT2基因抑制表达,结果发现,siRNA1、siRNA2、siRNA3均能抑制家兔前体脂肪细胞中AKT2基因的表达,且siRNA2抑制效果最佳,AKT2基因的表达量下降了约60%。进一步采用siRNA2抑制家兔前体脂肪细胞内源性AKT2基因的表达,结果发现脂肪的成脂分化过程受到了抑制,脂肪酸的合成减少,甘油三脂的含量及分化相关基因C/EBPα、PPARγ和FABP4基因的mRNA水平均显著下调。通过过表达载体对家兔前体脂肪细胞内源性AKT2基因进行过表达,结果发现能促进脂肪的成脂分化过程,脂肪酸的合成增加,甘油三酯含量及分化相关基因的C/EBPα、PPARγ和FABP4基因的mRNA水平均显著上升。综上所述,体外家兔诱导分化模型建立成功,且在家兔前体脂肪细胞分化过程中,抑制AKT2基因的表达可以抑制家兔前体脂肪细胞分化,过表达AKT2基因的能有效促进家兔前体脂肪细胞分化。