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本研究对乌龟生长激素受体基因(Growth hormone receptor,GHR)c DNA进行克隆测序,分析GHR和类胰岛素生长因子(Insuline-like growth factors,IGF-I)在组织中的差异性表达。观察在饥饿状态下,乌龟各组织GHR和IGF-I的表达量以及肝脏中GHR和IGF-I的表达量随着再投喂发生的变化,为研究乌龟在饥饿胁迫下生长轴相关基因调控机制提供理论依据。1.GHR c DNA的分子特征根据亲缘关系较近物种的GHR的保守区域设计引物,通过克隆测序拼接后获得cDNA全长序列,共3936 bp,包括5′UTR 219 bp,3′UTR 1870 bp,开放阅读框1848 bp,共编码615个氨基酸,蛋白质分子量为68.97 KD,等电点(pI)为4.38,疏水性氨基酸占37.88%,极性不带电和氨基酸占31.59%,酸性氨基酸占13.05%,碱性氨基酸占17.44%。氨基酸序列中含量最高的为天冬氨酸(Asp),占9.01%,次之为亮氨酸(Leu),占8.86%,最低的是甘氨酸(Gly),占1.82%。2.GHR和IGF-I的差异性表达采用实时荧光定量PCR技术对GHR mRNA的差异性表达进行检测分析,结果表明:GHR mRNA在脑、心脏、肺、肌肉、肝脏、脾、肾、膀胱、胃、前肠、中肠、后肠、性腺和脂肪共14种组织中均有表达,在肝脏中表达量最高,在性腺中表达量最低。IGF-I mRNA在各组织中都有表达,在肝脏中表达量最高,在消化道中表达量较高,在性腺中表达量极低。3.饥饿处理后GHR和IGF-I的差异性表达饥饿28天,肺、肝脏、膀胱、胃、前肠、后肠、精巢和脂肪组织中GHR mRNA的表达量出现下调,特别在肝脏组织中GHR mRNA表达量显著下降(P<0.05)。在脑、心脏、肌肉、脾、肾和中肠中有上调作用,其中心脏和肌肉中GHR mRNA表达量上升显著(P<0.05)。饥饿28天,大部分组织中IGF-I mRNA表达量出现下调现象,肝脏组织中IGF-I mRNA表达量显著下降(P<0.05)。在脑、心脏、肌肉、脾、肾和中肠中有上调作用,其中心脏和肌肉中IGF-I mRNA表达量上升显著(P<0.05)。4.饥饿再投喂处理后GHR和IGF-I的差异性表达饥饿处理第1天,雄性乌龟肝脏中GHR mRNA的表达量显著下降(P<0.05),第7天回升到对照组水平,之后持续下降,第21天显著下降(P<0.05)。再投喂后GHR mRNA呈现上升趋势,但仍显著低于对照组(P<0.05);雌性乌龟肝脏组织中GHR mRNA变化趋势与雄性乌龟相似,在饥饿第14天表达量上调达到显著水平(P<0.05),饥饿第28天下调显著(P<0.05),再投喂第28天其表达量恢复,与对照组无显著差异。饥饿对雄性乌龟肝脏中IGF-I mRNA表达量的影响呈现先上调后下降的趋势,饥饿第1天表达量显著上升(P<0.05),接着下降后保持稳定,再投喂后缓慢恢复到对照组的水平。两性的肝脏组织中IGF-I mRNA变化趋势一致,在饥饿第1天和第7天表达量显著上升(P<0.05),再投喂第7天表达量显著下降(P<0.05),第49天表达量显著高于对照组(P<0.05)。乌龟面对饥饿胁迫时,GHR和IGF-I mRNA的表达量变化规律与变温动物的鱼类相似,饥饿胁迫下肝脏GHR和IGF-I mRNA表达量呈下降趋势,并能在饥饿较长时间后达才到显著下降,与鱼类等变温动物更为接近。