花粉介导获得转基因玉米植株及转基因玉米杂交后代研究

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玉米(Zea mays L.)属禾本科、玉米属植物,在我国国民经济中占有非常重要的地位。通过基因工程的手段选育具有耐旱、耐盐碱和抗病的玉米新品种对于提高玉米的产量具有非常重要的作用。本论文主要分两部分:1)通过超声波辅助花粉介导法将含有BADH基因的质粒表达载体pBin438导入玉米自交系中,证明此方法在玉米转基因研究中是一种简便且高效的转化方法;2)将通过花粉介导法获得的转基因玉米植株进行杂交组配,通过将其农艺性状和抗病性与对照进行比较,可以得出转基因玉米的杂交后代的农艺性状普遍优于对照。主要的研究内容和结果如下:  (1)本研究主要是通过超声波辅助花粉介导法建立玉米转基因体系。通过预实验首先确定了所用的缓冲液为20%的蔗糖溶液,超声波的处理参数为:处理强度为200W,处理时间8s,间隔时间5s,处理次数6次。采用超声波辅助花粉介导法将甜菜碱醛脱氢酶(betain aldehyde dehydrogenase,BADH)基因转化玉米自交系,经过卡那霉素筛选、PCR扩增检测后得到转基因玉米植株。转化处理的393株玉米自交系植株有105株结实,结实率为26.7%,共收获种子464粒。转化处理后得到的种子经过卡那霉素处理后获得308株卡那霉素抗性植株,其中,PCR扩增呈阳性的植株有98株。因此,以收获的转化处理种子为基数,通过超声波辅助花粉介导法对甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因转化时的转化效率为21.1%。  (2)本试验以海‘92-1’转基因玉米株系作父本和13株不同的金黄96C转基因玉米株系作母本进行杂交所得13个杂交种作为试验材料,进行转基因玉米杂交后代农艺性状调查。通过与非转基因玉米杂交后代的农艺性状进行比较和抗病性鉴定,可以看出转基因玉米杂交后代的发病率明显低于非转基因玉米杂交后代,转基因和非转基因玉米杂交后代在株高、穗位高、穗长、籽粒中和百粒重五个性状上存在明显差异,在穗粗、穗重和穗行数等性状上面差异显著,综合分析农艺性状选出了两个优良的杂交组合2008060×海92-1(chi)和2008066×海92-1(chi)。  (3)通过上述的两个实验可以得出超声波辅助花粉介导法在玉米转基因研究中是一种行之有效的转化方法。通过对用超声波辅助花粉介导法获得的转基因玉米植株进行杂交后代的农艺性状调查,从中选出了两个各种农艺性状明显优于对照的杂交组合,从而说明转基因育种技术在培育玉米新品种方面具有重要的作用。
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