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目的：
腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome，IBS-D)是一种以反复发作的腹泻、腹胀、腹痛为主要症状的功能性肠道疾病，属中医“泄泻”病症范畴。以“疏肝健脾止泻法”组方的肠激安方是治疗IBS-D的临床验方，已申报为新药，治疗效果显著。肠激安方由白芍、白术、防风、延胡索、黄连等13味药组成，是痛泻要方和四君子汤加减化裁而来，具有益气健脾，止泻止痛的功效。本实验以药动学为出发点，根据肠激安方的君臣佐使理论以及课题组的前期研究基础，选择肠激安方10种主要成分(芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素)进行含量测定，并建立IBS-D模型大鼠，采用UHPLC-MS/MS方法测定肠激安方灌胃正常大鼠和IBS-D大鼠后10种成分的血药浓度并进行药代动力学研究，为探索口服肠激安方的体内过程以及其治疗IBS-D的药效成分奠定基础，也为肠激安方的临床应用提供科学参考依据。
方法：
一、UHPLC-MS/MS同时测定肠激安方10种成分的含量
结合课题组前期肠激安方的液相色谱研究和文献基础研究，建立同时测定肠激安方中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和延胡索乙素含量的UHPLC-MS/MS检测方法。
二、建立IBS-D模型及模型评价
参考课题组前期的造模方法和文献研究，采用醋酸刺激及夹尾刺激的方法建立IBS-D大鼠模型，并通过内脏敏感性、Bristol粪便分型、粪便含水量和粪点数、糖水偏好和病理组织学检测进行模型评价。
三、建立同时测定大鼠血浆中肠激安方10种成分的含量测定方法
色谱条件为Phenomenex-C18色谱柱(2×50mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速0.7mL/min，柱温35℃，进样量10μL。质谱条件为电喷雾离子源(ESI)，采用选择反应监测(SRM)的扫描模式正负离子同时检测，建立10种成分同时在血浆中的含量测定方法，并通过专属性，线性，精密度，准确度，提取回收率，基质效应和稳定性进行方法学考察。
四、肠激安方在正常大鼠和IBS-D模型大鼠体内的药动学研究
正常组和模型组大鼠(n=6)给药前禁食不禁水12h，按7.0g冻干粉/kg体重的剂量灌胃大鼠(芍药苷2.630mg·g-1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.060mg·g-1、橙皮苷1.384mg·g-1、柚皮苷2.336mg·g-1、升麻素苷0.449mg·g-1、升麻素0.085mg·g-1、5-O-甲基维斯阿米醇苷0.231mg·g-1、盐酸小檗碱1.208mg·g-1、盐酸巴马汀0.392mg·g-1、延胡索乙素0.078mg·g-1)，给药完毕后，分别在0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24h大鼠眼眶静脉丛取血0.5mL，分离血浆，样品经过处理后测定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的血药浓度，用PKsolver2.0软件计算药动学参数，并用SPSS20.0软件对正常组和IBS-D模型组主要药动学参数进行统计分析。
结果：
一、UHPLC-MS/MS同时测定肠激安方10种成分的含量
建立的检测方法灵敏、快速、高效，方法学考察结果均符合中药化学成分的含量测定要求。芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的平均含量分别为2.630mg·g-1、0.060mg·g-1、1.384mg·g-1、2.336mg·g-1、0.449mg·g-1、0.085mg·g-1、0.231mg·g-1、1.208mg·g-1、0.392mg·g-1、0.078mg·g-1。
二、建立IBS-D模型及模型评价
研究结果显示，与正常组对比，模型组大鼠腹泻症状明显，粪便含水量、粪点数、糖水偏好和内脏敏感性均有显著性差异(P＜0.05)，病理组织学检测显示，模型组大鼠肠道未发生器质性的病变，表明IBS-D大鼠造模成功。
三、建立同时测定大鼠血浆中肠激安方10种成分的含量测定方法
成功建立了肠激安方中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素在血浆中的UHPLC-MS/MS含量测定方法，样品处理过程简便，样品在7min内完成分析，且分析方法学考察结果均符合生物样品的定量分析要求。
四、肠激安方在正常大鼠和IBS-D模型大鼠体内的药动学研究
研究结果表明，正常组与IBS-D模型组中10种成分的药动学行为存在一定的差异。与正常组对比，芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和盐酸小檗碱在IBS-D大鼠体内的Cmax和AUC0-t更大，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而延胡索乙素、盐酸巴马汀和升麻素仅Cmax的差异具有统计学意义(P＜0.05)。升麻素苷的药动学参数在两组间均无统计学意义(P＞0.05)。
结论：
1.芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和延胡索乙素为肠激安方的入血成分，可能是治疗IBS-D的药效物质基础。
2.大鼠在醋酸刺激肠道的作用下导致腹泻症状显著，内脏敏感性增高，夹尾刺激造成肝郁脾虚证型，联合的造模方法导致大鼠的肠道功能紊乱，但肠道粘膜没有病理损伤，基本符合IBS-D的诊断标准，证明了肝郁脾虚IBS-D大鼠模型复制成功。
3.肠激安方灌胃正常大鼠和IBS-D模型大鼠后血浆中10种成分的药代动力学具有差异性，模型组中药物的吸收效果更好，验证中医“辨证论治”理念。
腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant Irritable Bowel Syndrome，IBS-D)是一种以反复发作的腹泻、腹胀、腹痛为主要症状的功能性肠道疾病，属中医“泄泻”病症范畴。以“疏肝健脾止泻法”组方的肠激安方是治疗IBS-D的临床验方，已申报为新药，治疗效果显著。肠激安方由白芍、白术、防风、延胡索、黄连等13味药组成，是痛泻要方和四君子汤加减化裁而来，具有益气健脾，止泻止痛的功效。本实验以药动学为出发点，根据肠激安方的君臣佐使理论以及课题组的前期研究基础，选择肠激安方10种主要成分(芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素)进行含量测定，并建立IBS-D模型大鼠，采用UHPLC-MS/MS方法测定肠激安方灌胃正常大鼠和IBS-D大鼠后10种成分的血药浓度并进行药代动力学研究，为探索口服肠激安方的体内过程以及其治疗IBS-D的药效成分奠定基础，也为肠激安方的临床应用提供科学参考依据。
方法：
一、UHPLC-MS/MS同时测定肠激安方10种成分的含量
结合课题组前期肠激安方的液相色谱研究和文献基础研究，建立同时测定肠激安方中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和延胡索乙素含量的UHPLC-MS/MS检测方法。
二、建立IBS-D模型及模型评价
参考课题组前期的造模方法和文献研究，采用醋酸刺激及夹尾刺激的方法建立IBS-D大鼠模型，并通过内脏敏感性、Bristol粪便分型、粪便含水量和粪点数、糖水偏好和病理组织学检测进行模型评价。
三、建立同时测定大鼠血浆中肠激安方10种成分的含量测定方法
色谱条件为Phenomenex-C18色谱柱(2×50mm，5μm)，流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速0.7mL/min，柱温35℃，进样量10μL。质谱条件为电喷雾离子源(ESI)，采用选择反应监测(SRM)的扫描模式正负离子同时检测，建立10种成分同时在血浆中的含量测定方法，并通过专属性，线性，精密度，准确度，提取回收率，基质效应和稳定性进行方法学考察。
四、肠激安方在正常大鼠和IBS-D模型大鼠体内的药动学研究
正常组和模型组大鼠(n=6)给药前禁食不禁水12h，按7.0g冻干粉/kg体重的剂量灌胃大鼠(芍药苷2.630mg·g-1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷0.060mg·g-1、橙皮苷1.384mg·g-1、柚皮苷2.336mg·g-1、升麻素苷0.449mg·g-1、升麻素0.085mg·g-1、5-O-甲基维斯阿米醇苷0.231mg·g-1、盐酸小檗碱1.208mg·g-1、盐酸巴马汀0.392mg·g-1、延胡索乙素0.078mg·g-1)，给药完毕后，分别在0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、24h大鼠眼眶静脉丛取血0.5mL，分离血浆，样品经过处理后测定芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的血药浓度，用PKsolver2.0软件计算药动学参数，并用SPSS20.0软件对正常组和IBS-D模型组主要药动学参数进行统计分析。
结果：
一、UHPLC-MS/MS同时测定肠激安方10种成分的含量
建立的检测方法灵敏、快速、高效，方法学考察结果均符合中药化学成分的含量测定要求。芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素的平均含量分别为2.630mg·g-1、0.060mg·g-1、1.384mg·g-1、2.336mg·g-1、0.449mg·g-1、0.085mg·g-1、0.231mg·g-1、1.208mg·g-1、0.392mg·g-1、0.078mg·g-1。
二、建立IBS-D模型及模型评价
研究结果显示，与正常组对比，模型组大鼠腹泻症状明显，粪便含水量、粪点数、糖水偏好和内脏敏感性均有显著性差异(P＜0.05)，病理组织学检测显示，模型组大鼠肠道未发生器质性的病变，表明IBS-D大鼠造模成功。
三、建立同时测定大鼠血浆中肠激安方10种成分的含量测定方法
成功建立了肠激安方中芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、延胡索乙素在血浆中的UHPLC-MS/MS含量测定方法，样品处理过程简便，样品在7min内完成分析，且分析方法学考察结果均符合生物样品的定量分析要求。
四、肠激安方在正常大鼠和IBS-D模型大鼠体内的药动学研究
研究结果表明，正常组与IBS-D模型组中10种成分的药动学行为存在一定的差异。与正常组对比，芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷和盐酸小檗碱在IBS-D大鼠体内的Cmax和AUC0-t更大，差异具有统计学意义(P＜0.05)，而延胡索乙素、盐酸巴马汀和升麻素仅Cmax的差异具有统计学意义(P＜0.05)。升麻素苷的药动学参数在两组间均无统计学意义(P＞0.05)。
结论：
1.芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、橙皮苷、柚皮苷、升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和延胡索乙素为肠激安方的入血成分，可能是治疗IBS-D的药效物质基础。
2.大鼠在醋酸刺激肠道的作用下导致腹泻症状显著，内脏敏感性增高，夹尾刺激造成肝郁脾虚证型，联合的造模方法导致大鼠的肠道功能紊乱，但肠道粘膜没有病理损伤，基本符合IBS-D的诊断标准，证明了肝郁脾虚IBS-D大鼠模型复制成功。
3.肠激安方灌胃正常大鼠和IBS-D模型大鼠后血浆中10种成分的药代动力学具有差异性，模型组中药物的吸收效果更好，验证中医“辨证论治”理念。