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目的：本实验以细胞模型为基础,通过免疫组化和western blot方法观察水通道蛋白AQP-4及occludin蛋白在肝硬化肝性脑病脑水肿脑组织中的表达,同时结合肝性脑病时大鼠行为学、肝功能(ALT、AST、TBIL)、血氨(BA)、神经细胞胀亡、脑组织病理形态学的变化,来探讨毒消肝清丸对实验大鼠肝硬化肝性脑病脑水肿的影响,从而进一步证实毒消肝清丸对肝性脑病的治疗作用及机理。方法：1.将大鼠随机分为6组：正常组、模型组、乳果糖组、毒消肝清丸低、中、高剂量组。2.采用参照朱照金等给予50%四氯化碳溶剂每次每只0.5m1·100g-1,2次·wk-1,连续12wk皮下注射及联合(高脂低蛋白食物配合10%乙醇为唯一饮料)的复合因素造模方法制备肝硬化的模型,并结合采用于第13wk按250 mg/kg TAA隔日腹腔连续2次注射的造模方法制备肝硬化肝性脑病实验动物模型。3.造模成功后,除模型组及正常组外,其余各组均给予药物毒消肝清丸及乳果糖治疗。4.在给药7天后通过水迷宫实验及HE分级评分等观察毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病大鼠行为学影响的研究。5.水迷宫实验后处死全部大鼠,腹主动脉采血,检测动物血清酶学肝功能(ALT、AST、TBIL)、血氨检测,观察毒消肝清丸对肝性脑病模型大鼠ALT、AST、TBIL、血氨的影响。6.通过电镜观察毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织病理形态学的影响。7.通过免疫组化及western blot实验观察毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织中occludin蛋白表达的影响。8.通过免疫组化及western blot实验观察毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织中AQP-4蛋白表达的影响。结果：1毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠行为学影响的研究1)毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病大鼠学习记忆功能障碍的影响：毒消肝清丸治疗组在毒消肝清丸灌胃7d后,高、中、低剂量组大鼠潜伏期较肝性脑病模型组明显缩短(P<0.05),高、中剂量组较乳果糖组潜伏期明显缩短(P<0.05),有统计学意义。说明毒消肝清丸对于肝硬化肝性脑病所致学习及记忆障碍的确有一定的改善作用。2)毒消肝清丸对肝性脑病模型大鼠神经反射及分级的影响：肝性脑病大鼠的神经反射及肝性脑病的分期通过毒消肝清丸的治疗能得到显著的改善和降低,尤其是毒消肝清丸高、中剂量组对肝性脑病分期的降低作用与模型组比较差异显著。2毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织病理形态学的影响乳果糖组、毒消肝清丸高剂量、中剂量和低剂量试验药组肝性脑病脑水肿程度明显减轻,尤其在中、高剂量时更为明显,从病理形态学上表明毒消肝清丸对肝性脑病模型动物所致大鼠脑水肿有明显减轻作用。3毒消肝清丸对肝性脑病大鼠肝功能、血氨的影响与模型组比较,各治疗组动物血清各项指标明显下降(P<0.05),其中毒消肝清丸高、中剂量组动物肝功能(ALT、AST、TBIL)、血氨明显下降,有显著的差异(P<0.01),说明毒消肝清丸对HE大鼠肝功能(ALT、AST、TBIL)、血氨有明显改善作用。4毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠神经细胞胀亡的影响与模型组相比,毒消肝清丸高、中、低剂量组、西药组在细胞形态学上的表现为胞体缩小,核固缩,染色质凝聚等细胞胀亡表现,同时染色呈棕黄色或黄褐色颗粒,其数量、形态均低于模型组。在大鼠杏仁核组织细胞中,毒消肝清丸高、中剂量组与模型组比较有显著差异(P<0.01),乳果糖组与模型组比较亦有明显差异(P<0.01),而毒消肝清丸低剂量与乳果糖组比较差异不大(P>0.01)。说明毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠神经细胞胀亡有一定的抑制作用。5毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织中occludin蛋白表达的影响免疫组化和Western Blot结果进一步证明了在肝硬化肝性脑病时occludin蛋白表达和分布与血管内皮细胞的通透性改变密切相关,其下调时脑血管的通透性增加,肝性脑病时,脑血管通透性进一步加重,提示occludin的低表达可能是紧密连接(tight junctions,TJ)结构破坏的分子基础。从分子水平进一步证明毒消肝清丸通过清除氨等毒素,减轻对血脑屏障的损害,增加occludin蛋白的表达,减轻脑水肿,从而达到治疗肝性脑病的目的。6毒消肝清丸对肝硬化肝性脑病模型大鼠脑组织中AQP-4蛋白表达的影响AQP-4蛋白免疫组化和Western Blot结果相一致,由本实验可间接证明,肝硬化肝性脑病时患者脑水肿的程度与AQP-4蛋白的表达密切相关,为肝硬化出现的脑水肿提供理论依据,从而为临床毒消肝清丸治疗肝硬化肝性脑病脑水肿治疗提供新的理论依据和途径。结论：1.采用给予50%四氯化碳溶剂每次每只0.5m1·100g-1,2次·wk-1,连续12wk皮下注射,结合250 mg/kg TAA隔日腹腔连续2次注射的造模方法可成功制备肝硬化肝性脑病实验动物模型。2.本实验所观察各项指标的结果显示：毒消肝清丸可以改善肝性脑病大鼠行为学变化、降低BA的水平、恢复肝功能,影响脑组织病理学形态变化,抑制神经细胞胀亡,抑制AQP-4蛋白表达和增加occludin蛋白表达,减轻脑水肿,从而达到临床治疗肝性脑病的作用。3.毒消肝清丸可以通过补气健脾、滋阴清热、泻毒导滞以实现减少内毒素的吸收,保护肝、脑、肠的治疗目的,值得临床进一步研究和开发。4.通过理论及实验研究,我们更加证明以“脑肠同治”理论为指导,结合通腑泻下法,应用毒消肝清丸治疗肝硬化肝性脑病安全有效,值得临床推广。