滇山茶等植物提取物对人表皮黑素细胞株增殖活性和酪氨酸酶影响的研究

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目的:筛选出滇山茶、银线草、车桑子、重楼提取物中具有安全性与美白功效的复合物和有效浓度,为植物美白剂的开发提供理论依据。方法:将冻存的HEM-m复苏后培养并传代,取3-10代处于对数生长期的细胞接种于96孔培养板用于实验。将7种不同的植物提取物(包含滇山茶枝叶提取物、滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物、滇山茶花蕾提取物、滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物、银线草提取物、车桑子提取物、重楼提取物)分别设立10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL7个不同浓度梯度作用于体外培养的HEM-m72h,每个浓度均设立3个复孔,并设立含熊果苷的阳性对照组(黑素细胞+黑素细胞培养基+熊果苷100μg/mL、100ul/孔)、阴性对照组(黑素细胞+黑素细胞培养基)和空白对照组(单纯黑素细胞培养基),每组设立3个复孔。采用四甲基偶氮唑兰比色法(MTT法)测定不同提取成分和不同浓度梯度对HEM-m增殖活性的影响,采用体外氧化DOPA反应法测定其对酪氨酸酶活性的影响,NaOH裂解法测定对HEM-m黑素合成的影响。每次实验重复3遍。结果:1、植物提取物对黑素细胞增殖活性的影响:与阴性对照组相比,除滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物和车桑子提取物于10μg/mL时对黑素细胞增殖无明显影响外(P>0.05),其余不同浓度的实验药物和熊果苷均显示对细胞增殖活性一定的抑制作用(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组药物熊果苷相比,滇山茶枝叶提取物于400μg/mL,滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物于100、50、25、10μg/mL,滇山茶花蕾提取物于25、10μg/mL,滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物于10μg/mL,车桑子提取物于25、10μg/mL时,其对黑素细胞增殖活性的影响无差异(P>0.05)。余提取物与阳性对照组熊果苷相比,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中滇山茶枝叶提取物于800μg/mL时对黑素细胞增殖活性抑制作用较熊果苷弱,其它提取物于不同浓度时抑制黑素细胞增殖活性的作用均较熊果苷强。2、植物提取物对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响:与阴性对照组相比,阳性对照组熊果苷和实验组药物于任意浓度,其酪氨酸酶活性均显著低于阴性对照组(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组熊果苷相比,滇山茶枝叶提取物于10μg/mL,滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物于400、200、100、50、25、10μg/mL,滇山茶花蕾提取物于25、10μg/mL,滇山茶花蕾提取物70%乙乙醇洗脱物于100、50μg/mL,银线草提取物于400、50、25、10μg/mL,车桑子提取物于所有梯度浓度,重楼提取物于200、100、10μg/mL时,酪氨酸酶相对活性无显著差异(P>0.05)。余植物提取物浓度与阳性对照组熊果苷相比,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物于25、10μg/mL时,酪氨酸酶相对活性高于阳性对照组,其它提取物于特定浓度时酪氨酸酶相对活性低于阳性对照组。结论:滇山茶枝叶提取物于800μg/mL时安全性与抑制酪氨酸酶活性作用均优于熊果苷,于400μg/mL时安全性与熊果苷相当,但其抑制酪氨酸酶活性作用优于熊果苷。滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物于100-10μg/mL、滇山茶花蕾提取物于25-10μg/mL、车桑子提取物于25-10μg/mL时,其安全性与抑制酪氨酸酶活性的作用均与熊果苷的作用相当,可作为未来新型植物美白剂研发。
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