PCV2(porcine circovirus 2)主要引起断奶仔猪多系统衰弱综合征(Postweaningmultisystemic wasting syndrome，PMWS)，是以发热、渐进性消瘦、呼吸困难和黄疸等征状为特征的慢性传染病。为了能在临床上有效的预防和控制猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)对生产的危害，本试验设计研究猪圆环病毒基因工程疫苗及细胞灭活疫苗。本试验共分为以下四个部分： 第一部分针对当前“高热”病的流行情况，收集湖南、江西、广东一带的病料，对经PCR鉴定为阳性的病料进行病原分离和鉴定，共分离到7株流行毒株，命名为(BI、HN、LH、QY、 YO、ZJ、SH)。设计合成一对引物，扩增PCV2全基因组片段，并将7个病毒的PCR DNA片段分别克隆至pGEM-T Easy载体中进行序列测定，得到7个毒株的全基因序列。结果表明：测定的7个PCV2毒株的全基因组核酸序列长度均为1767 bp，这7个毒株核苷酸一致性在96.0％～99.9％之间；这7个PCV2分离株的ORF2(编码病毒衣壳蛋白)基因的序列比较发现其核苷酸的一致性在92.7％～99.9％之间，氨基酸一致性在93.2％～100％之间。此外将本研究中报道的这7个PCV2序列与另外15个GenBank上收录的PCV2全基因组序列和ORF2序列进行了比较。结果表明22个PCV2毒株的全基因组核苷酸一致性在94.1％～100％之间，ORF2的核苷酸序列一致性在89.7％～100％之间，而氨基酸的一致性在89.3％～100％之间，病毒衣壳蛋白的氨基酸序列比较发现在残基第53～91位差异显著，在第121-136位和第169～191位差异也较大。 第二部分参照GenBank中猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)ORF2基因序列，设计合成10条引物，对PCV2 QY株ORF2基因上含主要抗原位点的片段进行PCR扩增，构建重组原核表达质粒pBCX-ORF2(A1-A9)。原核表达质粒导入Rosetta(DE3)后用IPTG进行诱导表达，收集菌液进行SDS-PAGE，结果表明成功构建的9个重组质粒中有4个在Rosetta(DE3)中成功表达。对pBCX-ORF2-A1的表达产物进行WesternBlotting分析，该蛋白可以被PCV2阳性血清识别，为PCV2感染诊断和抗体检测方法提供了依据。在最佳诱导条件下获得猪Ⅱ型圆环病毒重组pBCX-ORF2-A1蛋白的基础上，利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化，通过Western Blotting检测证明表达产物具有良好的抗原性。将纯化后的蛋白制成基因工程疫苗进行猪体免疫试验。 第三部分设计研究猪圆环病毒细胞灭活疫苗。由于PCV1与PCV2均可在PK15细胞上增殖而不引起细胞产生病变，给生产细胞苗造成很大困难。因此，如何提高病毒的滴度成为成功研制细胞灭活疫苗的重点。在优化了PK15细胞培养条件后，将接种病毒的PK15细胞培养24 h，用D-氨基葡萄糖处理己长成单层的PK15细胞，作用30 min后弃掉，加入新鲜培养基继续传代培养48～72 h，收获病毒。通过PCR的方法确定病毒含量后生产细胞灭活疫苗并进行动物试验。 第四部分为动物试验，将30头断奶仔猪(32日龄，PCV2阴性)随机分为3组，即空白对照组、细胞灭活疫苗组、基因工程疫苗组，每组10头。免疫组每头颈部肌肉注射疫苗2 mL，两周后按相同方法加强免疫一次。分别于免疫前、一免7、14、21、28、35天采血，分离血清，用世纪元亨生产的猪圆环病毒Ⅱ型抗体酶免检测试剂盒检测ELISA抗体。同时抽提基因组DNA，进行病毒血征的检测。结果表明：一免14天后免疫组产生抗体水平(个别呈抗体阴性)，一免28～35天抗体水平较高。在免疫前及免疫后的整个过程中各组均未检测到PCV2。根据初步的动物试验结果，两种疫苗都可以诱导机体产生特异性抗体。 因此，重组pBCX-ORF2-A1蛋白及细胞灭活苗都有发展为预防PCV2相关疾病疫苗的潜力，但要用于生产还需要进一步的研究。此研究为PCV2基因工程疫苗及细胞苗的开发奠定了一定的基础。