克雷伯氏菌生物合成1,3-丙二醇途径中代谢酶活的分析

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wanghan0106
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本文对克雷伯氏肺炎杆菌(K.pneumoniae)中通常认为合成1,3-丙二醇(1,3-PD)的三种关键酶[甘油脱氢酶(GDH)、1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)及甘油脱水酶(GDHt)]的测定方法进行优化,建立了完整的测定酶活体系;然后考察不同发酵条件对菌体代谢途径中三种酶的表观酶活及产物浓度之间的影响,结果发现氧的存在确实对GDH和PDOR起到抑制作用,但1,3-PD的产量却大大增加;其中菌体在以葡萄糖作为唯一发酵碳源菌体生长过程中,发现能够检测到GDH、PDOR及GDHt的酶活;考察了5L发酵罐中GDH、PDOR、GDHt酶活的关系分析发现GDH、PDOR、GDHt酶活与1,3-PD浓度不完全关联,在实践过程中也发现通过分析三种酶的变化不能对异常发酵评判和分析提供有有价值的信息。利用SDS-PAGE电泳分析上述不同发酵条件下酶活的变化,结果显示分子量约为40KD、不同于三种酶的蛋白条带很可能与产物1,3-PD的生成相关;实验进一步利用双向电泳技术结合Swiss/Prot与TrEMBL蛋白质数据库对双向电泳图谱上的蛋白斑点进行蛋白质组匹配差示图谱,匹配蛋白中明显差异的蛋白也有分子量约为40KD的蛋白点。
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