实验室前期的研究结果发现在低温压力条件下斑马鱼表观酶类的表达有着不同程度的变化,低温处理后的斑马鱼ZF4细胞中hdac8、kdam4A等基因的表达相较于对照组表达降低。这可能意味着表观遗传学机制的调节对于鱼类适应低温等压力环境有着至关重要的作用。组蛋白去乙酰化酶（HDACs）作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,HDAC8为Zn²⁺依赖性I类HDAC酶,其大小为42 k Da,由377个氨基酸组成^[1],因为其独特的结构和功能专一性,可以很容易地从其它HDAC酶中被识别出来^[2]。近年来对于hdac8的研究大多集中在其作为治疗靶点在病理生理学中作用,有报道称RNA干扰（RNA interference,RNAi）介导的HDAC8的下调有助于抑制人宫颈癌、结肠癌和肺癌细胞株的增殖,然而当HDAC8的表达升高时,肝癌细胞的凋亡被抑制,其增殖速度升高^[3]。有学者发HDAC8酶活性对野生型和突变p53表达的也会产生重要影响^[4],亦有学者发现HDAC8表达的下降或抑制HDAC8酶活性能够影响具有p53突变的细胞的增殖,这一现象明确指出HDAC8抑制剂对p53突变载体肿瘤的影响^[1]。然而对于hdac8在鱼类生长发育或压力耐受下的作用却少有人研究。本实验预期通过敲降斑马鱼ZF4细胞的hdac8基因,观察在正常生长条件下ZF4细胞会发生哪些变化,通过分析这些变化,寻找hdac8基因在鱼类适应低温等压力环境下所发挥的功能,从而对鱼类在适应低温等压力环境下的表观遗传机制的研究打下基础。我们设计合成了斑马鱼HDAC8的sh RNA,用EcoRI和AgeI酶切构建了pLKO.1-hdac8-sh RNA重组质粒并且同时构建了一个阴性对照重组质粒（nc）,接着我们将p CMV-VSVG、p CMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装。收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-q PCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降。随后我们使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况。Bax、caspase-3蛋白对细胞凋亡的影响是正向的,它们表达的升高会提高细胞的凋亡水平。相反的是Bcl2蛋白表达的升高会抑制细胞的凋亡。同时我们克隆了斑马鱼hdac8的全长cDNA,并利用pLVX-IRES-NEO质粒用EcoRI和Xba I酶切构建了斑马鱼hdac8的过表达质粒,并将其转染进HEK-293T细胞中检测了其表达效果。Western Blotting结果显示hdac8的过表达质粒在HKE-293T细胞中高效表达,我们构建的质粒可以用于后续实验。研究发现:hdac8的正常表达对ZF4细胞的生长起着重要作用,敲降hdac8的细胞与对照组（nc）细胞相比存活率显著下降（p<0.05）。同时我们检测到,敲降hdac8的细胞内凋亡相关基因bax及caspase-3的表达量相比对照组均显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的。总而言之,细胞内稳态的正常运行需要hdac8的参与,hdac8对细胞凋亡水平的调节作用对于低温等各种压力下的适应可能会起到重要影响。hdac8对于斑马鱼细胞凋亡水平具有调节作用的发现为后期对斑马鱼凋亡相关的研究提供基础,为对鱼类在压力环境下适应机制方面的研究提供了新的思路。