褐飞虱(Nilaparvata lugens Stal)是一种吸食水稻汁液的害虫,常对水稻产量造成毁灭性打击。传统农业中,通过大量使用杀虫剂来防治褐飞虱,但这仅是治标不治本,更易造成严重的环境污染。发掘抗性基因、培育抗性水稻品种是公认最为经济有效、环境友好的褐飞虱防治手段。至今为止,已经在稻种资源中发掘鉴定了 30多个抗褐飞虱基因,但现有研究中对其抗虫机理的了解甚少。本文在前人克隆水稻抗褐飞虱基因BPH9的基础上,进一步对其抗性机制进行了探索,所得结果如下:1、通过收集褐飞虱唾液蛋白,利用质谱测序方法对其进行鉴定,构建了水稻褐飞虱唾液蛋白质组数据库。本研究共鉴定到161个蛋白,蛋白注释结果表明酶类蛋白在鉴定出的唾液蛋白中所占比例最高。GO分析表明褐飞虱唾液蛋白主要参与生物反应过程、分子功能的发挥与细胞组分的形成。2、为筛选BPH9基因所识别的效应子,本论文共获得了 120个褐飞虱唾液蛋白基因的全长cDNA克隆,分析了其是否具有信号肽及可能的信号肽切割位点,分别构建了以pEarleyGate100为骨架的载体。通过将这些候选效应子与BPH9共转烟草进行瞬时表达未能得到能特异性激活BPH9产生超敏反应的特异效应子。但本研究筛选得到五个能引起烟草细胞死亡的候选效应子,对其中的两个效应蛋白SFP、His进行了功能验证与定位分析,证实了 SFP、His的效应子本质。3、利用酵母双杂交技术,以BPH9基因的CC、LRR结构域分别筛选了水稻9311、NIL9-9311酵母文库,确定OsClp6、VAS、DFP、GRP四个BPH9互作蛋白。综上所述,本文鉴定分析了褐飞虱唾液蛋白,对抗褐飞虱基因BPH9的效应子进行了初步筛选,并利用酵母双杂交技术筛选了 BPH9基因的互作蛋白。本论文工作为深入分析BPH9介导的抗褐飞虱分子机理打下了坚实的基础。