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β2微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）是由机体产生的一种内源性低分子量血清蛋白质，分子量11.8KD，是细胞膜上完整主要组织相容性复合物（majorhistocompatibility complex，MHC）Ⅰ类分子的轻链（β链），在免疫应答中起重要作用。随着代谢和MHC的降解，β2微球蛋白分离后以游离形式存在于血清、尿液、脑脊液、唾液等体液中，含量较低且恒定。近年来，β2微球蛋白在基础医学及临床诊断上的应用已成为研究热点，检测血清或尿液中β2微球蛋白含量的变化成为评价相关脏器功能和某些疾病发生、发展和预后的重要指标。β2微球蛋白的检测方法主要有免疫比浊法、免疫透射比浊法、化学发光法等，其中酶联免疫法因简便、快速、敏感性高而备受临床欢迎，而目前可应用于临床的ELISA试剂盒较少，因此研制一种快捷有效的ELISA检测方法具有重要意义。本研究以高纯度的人β2微球蛋白作为免疫原，采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法免疫纯系BALB/c小鼠，取免疫脾细胞与对数期SP2/0细胞进行融合，间接ELISA法筛选阳性孔。经3~4次克隆化、多次传代及冻存后复苏，共筛选获得5株稳定分泌抗人β2微球蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为2G7、2H2、3F9、5D10、8E12。经鉴定，5株单抗亚型皆为IgG1类，腹水效价均在10-7-10-9之间，腹水经Protein-A亲和层析法纯化后进行电泳，结果显示5株单抗纯度良好。间接ELISA法和Wersten blot鉴定单抗特异性，结果表明5株单抗均能与人β2微球蛋白发生特异结合，而与人血清白蛋白、血红蛋白、EB病毒基因工程抗原、支原体基因工程抗原无交叉反应，证明5株单抗具有良好的特异性和反应原性。采用改良过碘酸钠法分别对5株单抗进行酶标，经抗体配对实验筛选出一对可用于双抗体夹心ELISA的配对抗体，初步建立了β2微球蛋白双抗体夹心定量ELISA检测方法。经方阵滴定实验确定了包被抗体最佳包被浓度为3ug/mL，酶标二抗最佳工作浓度为1：4000，该检测方法线性范围为1.25～40ng/mL，最低检出限为1.25ng/mL，批内CV＜8%，批间CV＜12%，准确度良好。用本研究建立的检测方法检测35份临床血清标本β2微球蛋白含量，与Roche公司的β2微球蛋白检测试剂盒检测结果相比，相关系数R2=0.9550，两者具有良好的相关性。本研究成功制备了抗人β2微球蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，初步建立了人β2微球蛋白双抗体夹心定量ELISA检测方法，为进一步研制快速诊断试剂盒和其他检测方法奠定了良好的基础。