【摘 要】
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研究表明,睾丸特异表达基因对睾丸功能和发育起着重要的作用.在该课题的研究中,首先构建了人睾丸cDNA芯片,此芯片包含9216个阳性克隆,采用高通量的cDNA芯片杂交技术,将成年人
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研究表明,睾丸特异表达基因对睾丸功能和发育起着重要的作用.在该课题的研究中,首先构建了人睾丸cDNA芯片,此芯片包含9216个阳性克隆,采用高通量的cDNA芯片杂交技术,将成年人和胚胎期睾丸cDNA探针与人睾丸cDNA芯片进行杂交,通过基因芯片杂交筛选出一条在成年睾丸中高表达而在胚胎期睾丸低表达的基因,将其命名为:人睾丸cAMP反应结合蛋白(htCREB)基因,同时将人精子cDNA探针与睾丸芯片进行杂交;它在成年睾丸组织、胚胎睾丸及精子中的杂交信号分别为52.36,22.31,14.25,成人中的信号比胚胎高2.35倍.经测序发现该基因全长1650bp,利用在线生物信息学软件ntBLAST(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)分析发现htCREB是人CREB的不同剪接体,这条基因在基因库中的序列号为:AY347527.组织分布实验结果显示这条基因只在睾丸组织中有表达;在正常精子中也有表达;然而,在维支持细胞综合症(Sertoli cell-only syndrome-SCOS)的病人睾丸中没有发现它的表达.以上结果显示,htCREB可能参与人精子发生.为了分离与精子发生相关的蛋白质,该研究采用双向凝胶电泳技术分离和鉴定小鼠睾丸蛋白质.提取成年小鼠睾丸总蛋白,第一相电泳用一定长度的胶条进行等电聚焦,第二相用常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳.其次,为了分析GTW对小鼠精子发生相关蛋白质的影响,我们应用双向凝胶电泳分离给GTW1周,2周小鼠睾丸蛋白提取液和正常小鼠睾丸蛋白提取液,经计算机软件图像分析和比较后,得到了30个表达差异的蛋白点,这些在小鼠睾丸不同给药阶段差异表达的蛋白质可能在精子发生中起重要作用.综上所述,我们成功运用双向凝胶电泳技术对正常及受GTW影响的小鼠睾丸蛋白质组进行了分离和比较,获得了30个差异表达的蛋白质,为从蛋白质水平上研究GTW的作用及精子发生的机制奠定了基础.
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