【摘 要】
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目的:构建PCL/PDA+Exo+GSNO改良复合生物膜并检测其对h BMSCs成骨分化及RAW264.7细胞炎症调节的影响,为构建新型聚己内酯生物屏障膜提供理论参考。方法:（1）采用试剂盒提取方法从h BMSCs中分离、提纯Exo;采用静电纺丝技术制备PCL屏障膜;（2）采用PDA涂层将Exo及GSNO固定在PCL屏障膜上,构建四种改良复合屏障膜,分别为:（a）PCL/PDA（对照组）;（b）P
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目的:构建PCL/PDA+Exo+GSNO改良复合生物膜并检测其对h BMSCs成骨分化及RAW264.7细胞炎症调节的影响,为构建新型聚己内酯生物屏障膜提供理论参考。方法:（1）采用试剂盒提取方法从h BMSCs中分离、提纯Exo;采用静电纺丝技术制备PCL屏障膜;（2）采用PDA涂层将Exo及GSNO固定在PCL屏障膜上,构建四种改良复合屏障膜,分别为:（a）PCL/PDA（对照组）;（b）PCL/PDA+GSNO;（c）PCL/PDA+Exo;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo;（3）在四组屏障膜上分别接种RAW264.7细胞和h BMSCs;（4）采用q RT-PCR方法检测四组复合生物膜（a）PCL/PDA（对照组）;（b）PCL/PDA+GSNO;（c）PCL/PDA+Exo;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo复合屏障膜对RAW264.7细胞炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α及i NOS）诱导水平;（5）采用ALP染色及ALP检测试剂盒检测h BMSCs ALP活性,并通过q RT-PCR检测h BMSCs成骨相关基因（ALP、OPN、Col-1及RUNX2）表达情况。结果:（1）从h BMSCs中提取并纯化得到Exo,结果显示Exo在电镜下呈椭圆形或杯状,粒径的高峰出现在50 nm和120 nm处;（2）采用静电纺丝技术制备得到（a）PCL/PDA;（b）PCL/PDA+GSNO;（c）PCL/PDA+Exo;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo四组生物膜;（3）将RAW264.7细胞（LPS刺激后的）分别接种在四组生物膜上培养24h后,（b）PCL/PDA+GSNO;（c）PCL/PDA+Exo;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组生物膜炎性因子表达水平均明显低于（a）PCL/PDA（对照组）,其中（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组IL-6基因表达水平下降最为显著,约为（a）PCL/PDA（对照组）1/5,P＜0.05;此外,（d）组TNF-α、i NOS及IL-1β基因表达水平分别约为对照组的1/2、1/3及1/4,P＜0.05,均具有统计学意义;（4）将h BMSCs接种在（a）PCL/PDA、（b）PCL/PDA+GSNO、（c）PCL/PDA+Exo和（d）PCL/PDA+GSNO+Exo四个组生物膜上培养3 d后（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组成骨基因ALP表达水平显著增高,约为对照组2倍,P＜0.001;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组Col-1基因表达水平约为对照组1.7倍,P＜0.001;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组RUNX2基因表达水平约为对照组的1.5倍,P＜0.01;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组BMP-2基因表达水平约为对照组的2.2倍,P＜0.05,均具有统计学意义。（5）将h BMSCs细胞接种在（a）PCL/PDA、（b）PCL/PDA+GSNO、（c）PCL/PDA+Exo和（d）PCL/PDA+GSNO+Exo四个组生物膜上共培养7 d后,ALP染色结果和检测结果均提示:（b）PCL/PDA+GSNO、（c）PCL/PDA+Exo和（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组ALP活性相比于（a）PCL/PDA组显著增高;其中,（d）PCL/PDA+GSNO+Exo组ALP活性最强,约为对照组1.7倍,P＜0.01。结论:（1）成功构建（a）PCL/PDA;（b）PCL/PDA+GSNO;（c）PCL/PDA+Exo;（d）PCL/PDA+GSNO+Exo四组复合屏障膜;（2）PCL/PDA+GSNO+Exo复合屏障膜具有显著促进成骨及抑制炎症的能力,有望成为新型改良复合膜材料。
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