【摘 要】
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编码人成熟脑源性神经营养因子和神经营养素3的基因克隆入pBV220原核表达载体,位于PP启动子控制下,在大肠杆菌中表达.表达;的重组蛋白各占菌体总蛋白 20%和25%.抽提包涵体,
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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编码人成熟脑源性神经营养因子和神经营养素3的基因克隆入pBV220原核表达载体,位于P<,R>P<,L>启动子控制下,在大肠杆菌中表达.表达;的重组蛋白各占菌体总蛋白 20%和25%.抽提包涵体,用Cu<,+ +>氧化或在Cystein/Cysti ne氧化还原体系下复性,然后用阳离子术纯化.所得蛋白能促进九天龄鸡胚背根节突起生长;非还原和还原SDS-PAGE下的条带一致,约为15KD;HPLC凝胶色谱显示的一个峰可能相应于其二聚体形式;蛋白质免疫印迹为阳性.这些结果表明用大肠杆菌生产有活性的BDNF和NT-3是可行的.此外,用可溶性Thioredoxin表达体系表达,尽管这一表达体系成功表达了许多细胞因子,但即使在16℃低温下表达产物大部份以包涵体形式存在,.利用已有的BDNF成熟基因片段和上下游引物,用PCR直接扩增得到DIG标记的BDNF探针,用此探针原位检测海马神经细胞BDNFmRNA表达情况.通过设置阴性对照组和竞争实验组,说明杂交反应是特异的.原位杂交法观察神经细胞经药物处理后BDNF mRNA的变化,与文献报导用Northern法的结果一致.另外观察到BDNF mRNA表达差异不仅存在于海马不同区,在同一区的细胞群也不同.这种原位杂交方法,操作相对简便,但灵敏度还是不能用于检测BDNF mRNA在胶质细胞中表达.
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