中药山茱萸(Cornus of officinalis Sieb.et. Zucc.)始载于《神农本草经》,为山茱萸颗植物,以干燥且成熟的果肉入药,我国主产于河南、浙江、山西、陕西、四川等地。作为一种传统的中药,研究已有好几十年,现代药理学研究表明：山茱萸不仅具有调节免疫、降低血糖的功效,还具有治疗抗休克、抗衰老等的作用。人血清白蛋白是人血浆中的蛋白质,在体液中人血清白蛋白可以同许多内源性及外源性物质相结合,存储和转运脂肪酸、胆色素、氨基酸、类固醇激素、金属离子和许多药物分子等,同时维持血液正常的渗透压。所以以蛋白质为模型研究其与药物的相互作用,对于了解药物在体内的转运和代谢都具有重要的意义。分光光度法和荧光光谱法被广泛应用于直接测定药物蛋白的结合,是基于被测物质的物理化学性质的改变来进行测定。本论文通过建立在线透析偶联高效液相色谱系统(DS-HPLC),并应用于中药山茱萸提取物中环烯醚萜苷水溶性成分与生物大分子人血清白蛋白相互作用的研究,为研究中药中多组分同时与生物大分子间相互作用提供方法,为山茱萸的开发应用提供一定的理论信息和参考依据。本研究论文内容包括三章。第一章综述本部分首先是对山茱萸研究的概括,包括化学成分、药理研究和发展前景；对蛋白质的结构、血清白蛋白的结构和光学性质进行了介绍；之后介绍药物蛋白结合常用的研究方法原理及其优缺点,包括药物与蛋白结合的结合常数、结合位点数、作用力类型、热力学参数；最后描述了微透析的原理及特点、微透析采样与高效液相色谱技术的联用及应用。第二章DS-HPLC研究山茱萸中水溶性成分的透析特性实验首先采用HPLC-ESI-MS联用技术对山茱萸提取物透析液中水溶性成分进行定性分析,鉴定了马钱苷、獐牙菜苷、山茱萸新苷三种水溶性成分；接着对药物分子透析回收率的影响因素：灌流液流速、微透析膜长度进行了优化,选择的最佳条件为：灌流液流速2.0μL/min、微透析管长度9 cm；最后利用建立的DS-HPLC及在选择的最佳条件下测定了马钱苷、獐牙菜苷、山茱萸新苷的透析回收率及工作曲线,测得透析回收率从73.94到91.72%,且RSD都小于3.0%；结果表明DS-HPLC具有良好的准确性和可靠性,可应用于研究中药中多种活性成分与血清白蛋白的相互作用。第三章DS-HPLC研究山茱萸中水溶性成分与人血清白蛋白的结合特性本章采用DS-HPLC分析了中药山茱萸提取物中环烯醚萜营与人血清白蛋白相互作用的一些参数：首先考察了山茱萸与不同浓度人血清白蛋白的相互作用；然后从不同pH对结合度的影响进行了测定,结果表明：当人血清白蛋白浓度为0.6 mmol/L时,马钱苷的结合度在pH 7.4时为69.3%,pH 6.0时为74.5%,pH 8.9时为47.6%,而獐牙菜苷和山茱萸新苷在pH 6.0和pH 8.9时较低；最后采用Scatchard方程测定山茱萸中三种水溶性成分与人血清白蛋白相互作用的结合常数、结合位点数,进而计算了热力学常数,确定了作用力类型。结果表明,马钱苷和獐牙菜苷是以疏水作用为主,而山茱萸新营是以静电作用为主。