糖蛋白酶（Glycoprotease,Gcp）及其同源蛋白是一类存在于细菌、古菌和真核生物细胞内的保守蛋白,在细胞内发挥重要作用。YgjD是细菌细胞中的一种糖蛋白酶,是细菌适应环境和生存所必需的蛋白之一。最近发现YgjD与细胞内的另外2种蛋白YjeE和YeaZ形成复合物,在细胞内N⁶-苏氨酰氨甲酰腺苷酸-tRNA（tRNA N⁶-threonylcarbamoyladenosine）合成过程中发挥重要作用。本文对哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）的YgjD蛋白进行了表达、纯化和酶学性质研究,利用定点突变研究了YgjD蛋白的酶活性位点,进行了YgjD重组蛋白的促细菌生长和细胞复苏研究,主要研究结果如下:将含哈维氏弧菌ygjD基因的重组质粒pET-28a-ygjD在大肠杆菌进行了高效表达,用Ni亲和层析柱纯化获得YgjD重组蛋白,分别以牛血清白蛋白、ATEE、BTEE和BAPNA为底物测定了重组YgjD的蛋白水解酶活性,发现YgjD对牛血清白蛋白没有明显水解作用,但对ATEE、BTEE和BAPNA有明显水解活性,酶的比活力分别为59000 U/mg、53700 U/mg和8100 U/mg。研究了金属离子及部分酶修饰剂对重组蛋白YgjD的蛋白酶活性影响,发现添加1 mM的Zn²⁺后YgjD蛋白酶活性增加到155.55%,而Cu²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、Mg²⁺、EDTA、EGTA和DTT则能部分抑制YgjD的蛋白酶活性,其中Mn²⁺和PMSF的抑制作用最强。用SDS-PAGE电泳分析了YgjD和YeaZ在体外的相互作用,发现YeaZ能明显水解YgjD,而YgjD对YeaZ无明显作用。用酵母双杂交技术研究发现YgjD和YeaZ在细胞内有明显的相互作用。对YgjD酶活性位点氨基酸残基His¹¹¹、Glu¹¹³和His¹¹⁵进行了定点突变,构建了不同突变体pET-28a-ygjD表达质粒,在大肠杆菌中进行表达,比较了YgjD不同突变体的蛋白酶活性,发现突变体蛋白比YgjD野生型的酶活性均有不同程度的降低,其中含2个突变位点H111A+H115A的YgjD突变体蛋白酶活性完全丧失,说明His¹¹¹和His¹¹⁵两个氨基酸位点在维持蛋白酶活性方面发挥重要作用。重组YgjD对哈维氏弧菌SF-1有明显促生长作用,含H111A和E113A的突变体蛋白能够促部分进菌株SF-1的生长,但H115A和H111A+H115A突变体无明显促生长作用。重组YgjD对部分其他种的细菌如副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、溶藻胶弧菌（Vibrio alginolyticus）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）有一定促生长作用,但对红平红球菌（Rhodococcus erythropolis）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）无明显作用。YgjD对活的非可培养（VBNC）状态的哈维氏弧菌无明显复苏作用。