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本文首先探究了拟穴青蟹（Scylla paramamosain）在感染白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）或溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）过程中羧肽酶B（Carboxypeptidase B-like,Cpb）基因的作用。然后探究了拟穴青蟹microRNA-125在感染WSSV过程中的作用。1.拟穴青蟹在感染WSSV或溶藻弧菌过程中羧肽酶B基因的作用此前的研究发现羧肽酶B基因可能参与拟穴青蟹的先天性免疫反应,本论文通过RACE技术从拟穴青蟹体内获得一条全长为2316bp的基因序列,开放阅读框大小为1302 bp,编码一个含433个氨基酸残基的蛋白,5’UTR和3’UTR（Untranslated Regions,UTR）分别含有为 161 bp 和 853 bp,用 DNAMAN 软件推测羧肽酶B基因相对分子量约为48.514 kDa,等电点（PI）为8.494。序列分析结果显示拟穴青蟹羧肽酶B基因与Hyalellaazteca（XP018024120.1）的相似性最高,同源性为50%。利用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测各组织中羧肽酶B基因的表达量,结果显示在肝胰腺组织中的表达量最高,在鳃中的表达量次之,在血淋巴中的表达量中等,在心脏中的表达量最低。通过RNAi技术,达到抑制羧肽酶B基因表达的目的。在羧肽酶B基因被抑制后,检测青蟹典型的先天性免疫分子及信号转导因子表达量,结果显示,7个重要的免疫基因的表达量均显著下调。在抑制羧肽酶B基因表达后,青蟹血细胞总数（total hemocyte counts,THC）和超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）活性显著上调,酚氧化酶（phenoloxidase,PO）活性显著下调。以上结果表明羧肽酶B基因影响部分免疫信号通路和酶活性。青蟹在感染溶藻弧菌后,羧肽酶B基因的表达量显著下调。死亡率结果显示羧肽酶B基因被抑制后,感染溶藻弧菌的青蟹累计死亡率显著上调。血细胞吞噬试验结果显示,在羧肽酶B基因被抑制后,青蟹血细胞吞噬溶藻弧菌的能力显著上调,血细胞凋亡率也显著上调,而血细胞总数则显著下降。以上这些结果表明拟穴青蟹羧肽酶B基因能够通过影响细胞吞噬、细胞凋亡和血细胞总数,参与拟穴青蟹对溶藻弧菌的免疫反应。青蟹在感染WSSV后,羧肽酶B基因的表达量在24 h显著下调,随着时间的推移表达量逐渐上升,72 h时的表达量显著高于0 h。经Cpb-dsRNA处理后,青蟹血细胞吞噬WSSV的能力显著提高,血细胞凋亡率也显著上调,而血细胞总数则显著下降。说明在WSSV感染初期,羧肽酶B基因表达量被抑制后,促进了细胞吞噬和细胞凋亡,从而抑制病毒复制。生存分析和WSSV拷贝数显示,羧肽酶B基因被抑制后青蟹的累计死亡率和病毒拷贝数均显著上调。以上结果表明青蟹羧肽酶B基因能通过影响细胞吞噬、细胞凋亡等免疫反应参与青蟹对WSSV的免疫反应。但由于WSSV感染机制复杂,感染后期羧肽酶B基因可能被WSSV利用以促进病毒粒子复制。2.microRNA-125在拟穴青蟹感染WSSV过程中的作用microRNA-125（缩写为miR-125）参与多种疾病的发生（尤其是肿瘤）和宿主免疫反应,本研究旨在探索拟穴青蟹在感染WSSV时,miR-125所调控的先天性免疫功能。利用AMO-miR-125干扰miR-125的表达,通过RT-qPCR和RNA印迹杂交（Northern Blot）技术检测AMO-miR-125的干扰效果。在miR-125被成功干扰后检测青蟹10个已知先天性免疫分子及信号传导因子的表达量,其中仅Astakine基因的表达量显著上调,而羧肽酶B基因等其余基因的表达量均显著下调。本论文检测了拟穴青蟹各组织中Astakine基因的表达量,发现其在血细胞中的表达量最高。利用RNAi技术,用Ast-dsRNA抑制Astakine基因表达后,青蟹的血细胞总数显著下调,表明Astakine基因能影响血细胞总数。AMO-miR-125 处理后,青蟹的细胞凋亡率显著下调。表明 miR-125 可能通过调控免疫基因表达影响血细胞总数、细胞凋亡等参与青蟹的先天性免疫,根据目前检测的免疫基因表达结果,miR-125有可能调控Astakine基因,但仍需深入的研究。拟穴青蟹在感染WSSV后miR-125的表达量显著上调,表明miR-125参与青蟹对WSSV的免疫反应。病毒拷贝数和生存分析结果显示,AMO-miR-125处理后,感染WSSV的青蟹的WSSV拷贝数显著上调,累计死亡率均显著升高,表明miR-125可能会抑制WSSV的复制,并参与青蟹对WSSV的免疫反应。细胞吞噬试验中检测到细胞吞噬率显著降低,表明在感染WSSV时miR-125会调控细胞吞噬。凋亡试验结果显示,细胞凋亡率显著降低,表明在感染WSSV时miR-125会调控细胞凋亡。以上结果表明,拟穴青蟹在感染WSSV时,miR-125可能通过调控细胞吞噬和细胞凋亡在青蟹对WSSV的免疫反应中发挥重要的作用。综上所述,本研究首次获得拟穴青蟹羧肽酶B基因的全长序列,率先揭示了羧肽酶B在拟穴青蟹先天性免疫中的作用机制,证明了羧肽酶B基因参与青蟹对病原体（WSSV或溶藻弧菌）的免疫反应并发挥重要作用,为今后阐明青蟹的先天性免疫调控机理提供了理论依据。此外还探究了青蟹miR-125在青蟹先天性免疫中发挥的功能,发现miR-125可能通过调控Astakine基因的表达进而影响血细胞增殖、血细胞总数,以及细胞凋亡,参与宿主对WSSV的免疫反应,为深入探究青蟹microRNA的免疫调控机制提供了理论基础。