结核分支杆菌蛋白抗原及其单克隆抗体的初步研究

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据世界卫生组织(WHO)调查估计,全球1/3的人口感染过结核分支杆菌,每年引起约800万新感染患者和300万患者的死亡,死于TB的人数是其它传染病死亡人数的总和,占人类致死病因第7位。因此,WHO曾两度发出警告,要求各国采取有效措施控制这一严重传染病。 在我国,据2000年全国结核病流行病学抽样调查结果显示,人群结核分支杆菌感染率为44.5%,结核病死亡人数是因各种传染病和寄生虫病死亡总数的2倍。当前我国TB流行趋势和特点存在“五多一高”,即MTB感染人数多、现患结核病人多、死亡结核病人多、耐药结核病人多、农村结核病人多和传染性肺结核疫情居高不下。此外,青壮年患者占很大比重,15-45岁青壮年占发病患者总数的67.2%。因TB每年导致的经济损失达70多亿元,直接影响了国民经济的发展。 结核病再度成为严重危害我国人民健康的传染病之一,除了WHO总结的大量耐药菌株的产生、卡介苗效果欠佳、艾滋病的流行、人口结构和行为因素、工业和技术因素、国际贸易与旅游业的发展等诸多因素外,重要的是防治措施上有待研究、改进。尤其是我国缺乏对结核病的防治措施,包括病原学、诊断方法的方面的深入研究,缺乏快速、特异、灵敏的诊断方法。因此,我们采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白免疫印迹(Western Blot)等方法,开展了结核分支杆菌蛋白抗原的初步研究,为进一步研制结核病的特异诊断试剂和开展新疫苗的研制提供基础。 用蛋白免疫印迹(Western Blot)技术分析抗原抗体反应的高度特异性应用于结核分支杆菌的特异性、保护性抗原的筛选,获得分子量为30KD、3lKD的抗原。这两种抗原与结核病人的血清均发生阳性反应,而与正常小鼠血清和健康人血清呈阴性反应。 利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对从我国安徽、江苏和湖北省结核病人分离的结核分支杆菌敏感株和耐药株的菌体蛋白和滤液蛋白的蛋白多态性进行了分析。结果显示本次分析的结核分支杆菌菌株的菌体蛋白和滤液蛋白的主要蛋白抗原分布相似,但个别蛋白在不同菌株间的表达量及表达与否存有差异;菌体蛋白的主要条带的分子量为88KD、71KD、65KD、31KD、28KD、25KD、16KD、14KD、12KD。滤液蛋白的主要条带的分子量为65KD、60KD、31KD、27KD、23KD、18KD、10KD和6KD。
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