论文部分内容阅读
目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）-20-羟-二十烷四烯酸（20-HETE）在糖尿病肾病（DN）中的作用,并观察柚皮素（NAR）的作用及其可能机制。方法:高糖高脂饮食联合多次链脲佐菌素（STZ）(40 mg·kg-1·d-1×5 d)i.p.诱导糖尿病形成,继续喂养4 w,HE、Masson染色和透射电镜观察肾脏形态学变化,计算肾脏指数（KI,肾质量/体质量）、肾小球体积（GV）和胶原沉积分数（CVF）;自动生化分析仪检测尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、尿白蛋白等肾功能指标,确定DN形成。然后给予不同剂量NAR(25和75 mg·kg-1·d-1)i.g.4 w。为研究其作用机制,我们还观察了PPAR泛激动剂苯扎贝特（BEZ）对DN小鼠肾脏的作用;并利用葡萄糖30 mmol·L-1（HG）诱导NRK-52E细胞模型,观察PPARα拮抗剂MK886、PPARβ拮抗剂GSK0660和PPARγ拮抗剂GW9662对BEZ和NAR作用的影响。分别用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,Western blot方法检测蛋白表达,ELISA法检测20-HETE含量。结果:1.给予STZ 7 d后,模型小鼠空腹血糖值（FBG）持续超过11.1 mmol·L-1,糖尿病形成。4 w后,模型组小鼠BUN、Scr、尿白蛋白增加（P<0.01）,尤其是尿白蛋白较正常组升高了24.48倍;KI、GV和CVF均增加（P<0.01）,肾小管空泡变性、基底膜增厚、足突融合。上述结果提示,小鼠DN模型形成。模型小鼠肾脏PPARs和CYP4A蛋白表达下调（P<0.01）,血清20-HETE含量减少（P<0.01）。给予BEZ(75 mg·kg-1·d-1)4 w后,肾脏结构和功能明显改善;同时,BEZ上调PPARs和CYP4A表达（P<0.01）,增加20-HETE含量（P<0.01）。HG诱导NRK-52E细胞出现增殖和肥大,使PPARs和CYP4A蛋白表达下调,20-HETE水平下降（P<0.01）。BEZ(1μmol·L-1)抑制HG诱导的细胞增殖和肥大,并上调PPARs和CYP4A的表达（P<0.01）,增加20-HETE含量（P<0.01）;PPARs各亚型拮抗剂取消BEZ对HG作用的影响（P<0.01）,并阻断其对PPARs-20-HETE的上调（P<0.01）。2.DN形成后,给予不同剂量NAR治疗4 w,明显改善DN小鼠的肾脏结构和功能的损伤。NAR剂量依赖性地增加肾脏PPARs和CYP4A蛋白表达及血清20-HETE含量（P<0.05）。NAR(0.01,0.1,1μmol·L-1)剂量依赖性地抑制HG诱导的细胞增殖和肥大,并上调PPARs和CYP4A的蛋白表达（P<0.05）,增加20-HETE的含量（P<0.05）;PPARs各亚型拮抗剂可取消NAR(1μmol·L-1)对HG的作用,阻断NAR对PPARs-20-HETE的上调（P<0.01）。结论:1.PPARs-CYP4A-20-HETE下调参与了DN的病理生理过程。2.NAR对DN的肾脏损伤有改善作用,该作用可能与NAR激活PPARs,上调CYP4A-20-HETE水平有关。