论文部分内容阅读
目的：探讨清心开窍方三种有效成分对AD大鼠大脑海马及皮层区凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP表达的影响。 方法：选用成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠112只，随机分为7组:正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组、多糖组，每组16只。采用海马注射Aβ1-40诱导AD大鼠模型，造模后第2天开始灌胃，安理申组服用安理申溶液（盐酸多奈哌齐片，1.67mg/kg/d）、皂苷组服用皂苷提取物(9ml/kg/d)、挥发油组服用挥发油提取物(3.33ml/kg/d)、多糖组服用多糖提取物(8.33ml/kg/d)，正常组，假手术组，模型组给予等量双蒸水灌胃，各组每天干预一次，连续2周(上午10:00)。灌胃结束后，对各组AD大鼠进行心脏灌注生理盐水及4％多聚甲醛固定后，采用TUNEL染色法检测海马CA1区及皮层区细胞凋亡;采用免疫组化法观察Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP在大鼠海马CA1区及皮层区组织神经元中的表达;直接取双侧大脑海马及皮层区冻存，采用实时定量荧光PCR检测海马、皮层区Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA及β-APP mRNA表达情况;采用Western Blot(WB)法检测AD大鼠海马、皮层区Bax、Bcl-2、Caspase-3及β-APP的表达。 结果： 1.TUNEL检测结果: 正常组与假手术组之间海马、皮层区凋亡细胞数/高倍镜视野差别无统计学意义(P＞0.05);与假手术组相比，模型组海马及皮层区细胞凋亡数/高倍镜视野显著增多(P＜0.01);与模型组比较，各治疗组海马及皮层区细胞凋亡数均显著减少(P＜0.01);与安理申组比较，挥发油组和多糖组海马及皮层区细胞凋亡数均显著增多(P＜0.05，P＜0.01);安理申组和皂苷组比较凋亡细胞数/高倍镜视野差别无统计学意义(P＞0.05)。皂苷组较挥发油、多糖组减少显著(P＜0.01)， 2.免疫组化检测结果: 与模型组比较，多糖组海马区Bax、Bcl-2、β-APP及皮层区Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表达差别无统计学意义(P＞0.05)，挥发油组海马及皮层区β-APP表达差别无统计学意义(P＞0.05);其余治疗组皮层及海马区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显减少，Bcl-2表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01);与安理申组比较，清心开窍方三种有效成分组，海马及皮层区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增加，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。与皂苷组比较，挥发油组、多糖组Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增多，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。 3.PCR检测结果: 与模型组比较，多糖组海马区Bax、Bcl-2和Caspase-3及皮层区Bax、Bcl-2和β-APP表达差别无统计学意义(P＞0.05);多糖组皮层区Caspase-3和海马区β-APP表达明显减少，差别有统计学意义(P＜0.05);剩余治疗组皮层及海马区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显减少，Bcl-2表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01);与安理申组比较，清心开窍方三种有效成分组，海马及皮层区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增加，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。与皂苷组比较，挥发油组、多糖组Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增多，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05， P＜0.01)。 4.WB检测结果: 与模型组比较，多糖组海马区Caspase-3和β-APP及皮层区Bax、Bcl-2、Caspase-3和β-APP表达差别无统计学意义(P＞0.05);多糖组海马区Bax表达明显减少，海马区Bcl-2表达明显增多，差别均有统计学意义(P＜0.01);剩余治疗组皮层及海马区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显减少，Bcl-2表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01);与安理申组比较，皂苷组海马及皮层区Bcl-2、Caspase-3和β-APP表达无统计学意义(P＞0.05);皂苷组海马及皮层区Bax表达明显增多，差别有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01);挥发油组和多糖组海马及皮层区Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增加，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。与皂苷组比较，挥发油组、多糖组Bax、Caspase-3和β-APP表达明显增多，Bcl-2表达明显减少，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。 5.各实验中Bcl-2/Bax表达比值结果: 与正常组比较，模型组Bcl-2/BAX比值下调;与模型组比较，各治疗组Bcl-2/BAX比值上调。 结论： 1.清心开窍方三种有效成分可以不同程度抑制Aβ1-40诱导的AD大鼠大脑海马及皮层区神经元细胞凋亡，总皂苷抑制效果最显著，挥发油次之，总多糖效果最差。 2.清心开窍方三种有效成分能够抑制神经元细胞凋亡，可能与其能够降低AD大鼠大脑海马及皮层区Bax、Caspase-3和β-APP表达，增加Bcl-2表达，使Bcl-2/BAX比值上调有关。