目的:1.探讨脂肪间充质干细胞(Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells,ADMSC)在体外分离、培养和纯化的方法,并根据其表型进行鉴定,更好的提供间充质干细胞的来源。2.建立大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型并对其进行评估。3.探讨脂肪间充质干细胞对小肠缺血再灌注损伤的修复作用及机制。方法:1.取雄性SD大鼠腹股沟区的脂肪组织;进行分离、培养、纯化ADMSC(贴壁培养法),脂肪间充质干细胞生长到70%-80%时进而传代;第一次传代获得的ADMSC为第一代(P1),使用P3-P5进行后续试验。2.建立雄性SD大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型:SD大鼠禁食12小时后,2%戊巴比妥(2mg/kg)腹腔注射麻醉SD大鼠(200-250克)后,腹部皮肤消毒并打开腹腔,分离出肠系膜上动脉,使用无损伤小血管夹夹闭之60分钟后移除血管夹,缝合腹壁,建立SD大鼠小肠缺血再灌注损伤动物模型并对其进行评估。3.采用ADMSC腹腔注射处理,观察对小肠缺血再灌注损伤的修复作用及调控的机制;结果:1.将脂肪间充质干细胞成功分离、培养、纯化后,24小时后利用倒置相差显微镜观察原代接种有较多的细胞贴壁,细胞数量在72小时后进一步增多,经过换液和多次传代后,杂质细胞数进一步减少,脂肪间充质干细胞进一步得到纯化;通过细胞表面标记物检测结果为CD29和CD90都为高表达:CD45、CD34都为低表达,从而进一步确定是脂肪间充质干细胞。2.在夹闭大鼠在肠系膜上动脉后,动脉搏动消失,肠管颜色变灰白、出现痉挛、皱缩等情况。在恢复肠系膜上动脉血供以后,逐渐恢复肠管蠕动,颜色恢复正常,转为鲜红色。常规病理镜下观察小肠组织,大部分标本出现小肠上皮绒毛下间隙扩大,伴绒毛从粘膜固有层脱落,绒毛变钝,固有层及血管暴露,炎性细胞浸润;甚至出现粘膜固有层崩解,出血或溃疡形成。从而证实成功建立小肠缺血再灌注损伤动物模型。3.ADMSC够显著降低IL-6等炎症因子的释放,促进组织的抗炎性和小肠血管的再生,其保护作用与调控COX2-PGE2信号通路相关,促进小肠IR损伤的修复。结论:1.采用提取大鼠脂肪干细胞方法和培养技术可行,并且成功分离、培养及纯化纯度比较高的ADMSC,并且脂肪组织相对来源充足、获取也方便,可以提供充足的细胞为后续的实验需求。2.通过对大鼠肠系膜上动脉进行夹闭从而建立大鼠肠缺血再灌注损伤模型,引起小肠粘膜固有层崩解,出血甚至溃疡形成,可以作为本实验的动物模型。3.腹腔注射ADMSC能够显著降低炎症反应,通过COX2-PGE2信号通路促进小肠IR损伤的修复。