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目的:炙甘草汤具有抗多种实验性心律失常的作用,临床用于防治心律失常。我院生理教研室实验研究发现豚鼠、大鼠、家兔左心室流出道(主动脉前庭)的特定部位存在慢反应自律细胞,发现该部位组织学形态、电位特征以及0相和4相的离子流基础与窦房结起搏细胞相似。目前发现,临床上难以治疗的由电解质紊乱引起的室颤、早搏、心动过速等心律失常常与心室流出道的结构、形态和功能异常有关。实验室研究发现电解质紊乱影响了左心室流出道慢反应自律细胞的正常功能,其会导致一系列心律失常的发生。临床上,电解质紊乱如低钾血症、低镁血症、低钙血症等是威胁心脏正常功能并引起多种心律失常的重要因素之一。目前炙甘草汤对豚鼠左心室流出道电生理效应的研究在国内外尚未见报道,本实验利用常规玻璃微电极细胞内记录技术观察了在电解质紊乱情况下炙甘草汤对左心室流出道自发慢反应电位的影响,以寻找炙甘草汤抗心律失常作用的根本机制。通过本研究也期望对源于心室流出道的这些特发性心律失常的发生提供炙甘草汤临床预防和治疗的实验依据。
方法:利用健康豚鼠的离体心脏,制备左心室流出道(主动脉前庭)标本,用O2饱和的改良K-H液恒温(36±0.5℃)、恒速(10ml/min)灌流,标准玻璃微电极细胞内记录技术引导动作电位,微机实时采样并进行信号分析,记录不同时间的以下指标:最大舒张电位(MDP)、动作电位幅度(APA)、0相最大除极速度(Vmax)、4相自动除极速度(VDD)、复极50%和90%时间(APD50 and APD90)以及自发放电频率(RPF),分别观测了在制造了低钾、高钾;低镁、高镁;低钙、高钙实验条件下,炙甘草汤对离体豚鼠左心室流出道组织自发慢反应电位的影响。实验分组:
(1)炙甘草汤不同浓度对左心室流出道自律细胞电活动的影响:
①炙甘草汤不同浓度对左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9)。
(2)炙甘草汤不同浓度对低钾、高钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响:
①炙甘草汤不同浓度对低钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9);
②炙甘草汤不同浓度对高钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9)。
(3)炙甘草汤不同浓度对低镁、高镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响:
①炙甘草汤不同浓度对低镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9);
②炙甘草汤不同浓度对高镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9)。
(4)炙甘草汤不同浓度对低钙、高钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响:
①炙甘草汤不同浓度对低钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9);
②炙甘草汤不同浓度对高钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响(n=9)。
结果:
1.炙甘草汤不同浓度对左心室流出道自律细胞电活动的影响
1.1 炙甘草汤不同浓度对左心室流出道自律细胞电活动的影响。用20mg/ml炙甘草汤灌流时,稳定10min,和正常对照组相比,各项指标均无显著差异;用40mg/ml炙甘草汤灌流时,稳定5min,VDD减慢,和正常对照组相比有显著差异 (P<0.05);用80mg/ml炙甘草汤灌流时VDD,5min时明显减慢(P<0.01),APD50、APD90明显延长(APD50,P<0.05;APD90,P<0.05),RPF灌流后30sec即开始减慢,5min时减慢至最低值(P<0.05),RPF由给药前的94.53±13.26bmp变为54.26±17.33bmp,VDD由给药前的9.33±1.91 mV/s变为4.11±0.33 mV/s,并在10min内维持在此水平。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
2.炙甘草汤不同浓度对低钾、高钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响
2.1 炙甘草汤不同浓度对低钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[K+]为3mmol/L的低钾K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,再加入20mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比各项指标均无显著差异;用40mg/ml炙甘草汤灌流时MDP绝对值明显减小(P<0.05),APD50、 APD90明显延长(APD50,P<0.05;APD90,P<0.05),VDD明显减慢(P<0.05);用80mg/ml炙甘草汤灌流时MDP绝对值、APA明显减小(MDP,P<0.05;APA,P<0.05),APD50、APD90显著延长(APD50,P<0.01;APD90,P<0.01),RPF和VDD在灌流1min时开始减慢,5min时显著减慢(RPF,P<0.01;VDD,P<0.01),并维持相对稳定。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
2.2 炙甘草汤不同浓度对高钾实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[K+]为10mmol/L的高钾K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,再分别加入20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比各项指标均无显著差异。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
3.炙甘草汤不同浓度对低镁、高镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响3.1 炙甘草汤不同浓度对低镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[Mg2+]为1.3mmol/L的低镁K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,再加入20mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比APA明显减小(P<0.05);用40mg/ml炙甘草汤灌流时MDP绝对值、APA明显减小(MDP,P<0.05:APA,P<0.05),RPF明显减慢(P<0.05):用80mg/ml炙甘草汤灌流时MDP绝对值、APA明显减小(MDP,P<0.05;APA,P<0.01),APD50、APD90明显延长(APD50,P<0.05;APD90,P<0.05),RPF和VDD在灌流1min时开始减慢,5 min时达最慢(RPF,P<0.01;VDD,P<0.05),并维持相对稳定。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
3.2 炙甘草汤不同浓度对高镁实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[Mg2+]为5mmol/L的高镁K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,再分别加入20mg/ml、40mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比各项指标无显著差异;用80 mg/ml炙甘草汤灌流RPF在灌流1min时开始减慢,5 min时达最慢(RPF,P<0.05),并维持相对稳定。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。 4 炙甘草汤不同浓度对低钙、高钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响4.1 炙甘草汤不同浓度对低钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[Ca2+]为1.25mmol/L的低钙K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,再加入20mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比各项指标均无显著差异;用40mg/ml炙甘草汤灌流时APD50明显延长(P<0.05);用80mg/ml炙甘草汤灌流时APA明显减小(P<0.05),APD50、APD90明显延长(APD50,P<0.01:APD90,P<0.05),RPF和VDD在灌流1min时开始减慢,3min时达最慢(RPF,P<0.05;VDD,P<0.05),并维持相对稳定。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
4.2 炙甘草汤不同浓度对高钙实验条件下左心室流出道自律细胞电活动的影响。待正常对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,采集一组数据。再用[Ca2+]为5mmol/L的高钙K-H灌流液灌流,制造实验对照组,待实验对照组自发慢反应电位各项指标维持相对稳定后,分别加入20mg/ml、40mg/ml、80mg/ml炙甘草汤灌流,稳定10min,和实验对照组相比各项指标无显著差异。冲洗25min上述效应基本恢复到正常对照组水平。
结论:炙甘草汤可减慢豚鼠左心室流出道自律细胞的自律性,可降低由低钾、低镁、低钙实验条件下所引起的豚鼠左心室流出道自律细胞自律性的加快,结合炙甘草汤所含成分及其微量元素的分析,以及左心室流出道部位的电生理特性,推测炙甘草汤抗由左心室流出道慢反应自律细胞所引起的心律失常可能的最佳离子通道靶点是If、ICa-L、IK1。炙甘草汤可能防治由电解质紊乱引起的左心室流出道慢反应自律细胞功能异常所导致的心律失常的发生。